植物多酚提取实验操作过程的注意事项

储存事项：

1.裂解液AP1低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）

1.取适量植物组织（新鲜组织100mg或干重组织20mg）在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。

2.转移细粉到一个1.5ml离心管，不要解冻，加入400ul缓冲液AP1和4ulRNaseA（10

mg/ml），旋涡振荡1分钟，充分混匀，室温放置10分钟。 注意：由于植物材料多样性非常显著，所取实验材料的最适量需根据材料的不同，或相同材料的不同组织等进行摸索。

如果组织裂解困难，可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。大多数情况下不需要离心去除未完全裂解的组织，因为后面有一个离心去除的步骤。

3.65℃水浴10分钟，在水浴过程中颠倒离心管2-3次，混合样品。

4.加入130ul缓冲液AP2，涡旋振荡充分混匀，冰上放置5分钟，12，000rpm离心5-10分钟，小心吸取上清到一个新的1.5ml离心管，注意不要吸到界面物质。

5.可选步骤：为了去除上清液中的沉淀杂质，使提取基因组DNA纯度更高，可将上清液再次12，000rpm离心5分钟，小心吸取上清到一个干净的1.5ml离心管中。

6.计算上清量，加入0.7倍体积的异丙醇，充分混匀。此时会出现絮状基因组DNA。12，000rpm离心2分钟，弃上清。

7.沉淀加入700u170%乙醇漂洗，12，000rpm离心2分钟，弃上清。

8.加入700ul70%乙醇重复漂洗一次，12，000rpm离心2分钟，弃上清，倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇，空气晾干沉淀几分钟。

注意DNA不要干燥过头，否则极其难溶，也不能残留太多乙醇，否则乙醇会抑制下游如PCR、酶切等反应。

9.加入适量TE溶解DNA沉淀，轻弹管壁混匀，可以放置在65℃温育30-60分钟（不要超过一小时），中间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。