第１３卷第３期 杭州师范大学学报（自然科学版） Ｖ０Ｉ．１３ Ｎｏ．３ ２０１４年５月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ１ Ｍａｙ ２０１４ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—２３２Ｘ．２０１４．０３．０１６ 淫羊藿总黄酮对血管生成抑制作用的初步研究 刘姬艳 ，胡定慧 ，胡芳华 ，叶玉荷 ，吕 莉 ，张义梅。 （Ｉ．杭州师范大学生命与环境科学学院，浙江杭州３１００３６；２．四川省凉山州雷波县黄琅中学，四川凉山６１６５５６） 摘要：采用醇提法提取淫羊藿总黄酮，以鸡胚绒毛尿囊膜（ＣＡＭ）为模型检测其对血管生成的抑制作用． 结果表明：淫羊藿总黄酮提取得率为１．６５ ；０．２、０．１、０．０５ ｍｇ／ｍＬ淫羊藿总黄酮处理组对ＣＡＭ血管生成的抑 制率分别为８１．８ 、５４．５％和２７．３ ．因此，淫羊藿总黄酮对血管生成具有一定的抑制作用． 关键词：淫羊藿总黄酮；鸡胚绒毛尿囊膜；抗血管生成 中图分类号：Ｒ２８２．７１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７４—２３２Ｘ（２０１４）０３—０３０４—０３ 淫羊藿（Ｈｅｒｂａ Ｅｐｉｍｄｉｕｍ）又名仙灵脾、三枝九叶草、羊合叶等，系小蘖科（Ｂｅｒｂｅｒｉｄａｃｅａｅ）淫羊藿属 （Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ）植物．其味辛、甘，性温，归肝、肾经，药用历史悠久，疗效确切，是临床常用中药．现代药理研 究表明，淫羊藿是极具有潜能的抗白血病或抗肿瘤的药物，具有诱导白血病细胞分化和凋亡、逆转实体瘤 细胞恶性表型等作用口。］，但其抗血管生成的研究却未见报道．本研究以淫羊藿总黄酮为药物，以鸡胚绒毛 尿囊膜（ＣＡＭ）为模型，研究它对血管生成的抑制作用． １ 材料与方法 １．１ 实验材料 淫羊藿，购于绵阳安康大药房，经成都中医药大学马家骅博士鉴定为小檗科淫羊藿属箭叶淫羊藿；受 精鸡蛋（品种：草三黄）购自萧山玉泉家禽有限公司． １．２试剂与仪器 芦丁标准品，中国药品生物制品检定所．其余试剂均为国产分析纯．Ｔ１一ＳＭ１２０型倒置相差显微镜 （Ｎｉｋｏｎ），ＡＵＹ２２０电子分析天平（ｓＨＩＭＡＤＺＵ ｃＯＲＰＡＴＩＯＮ ＪＡＰＡＮ），ＲＥ５２—０５型旋转蒸发器（上海亚 荣生化仪器厂），７５２型紫外可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）． １．３淫羊藿总黄酮的提取与定量 根据张峻颖等 应用正交试验设计筛选淫羊藿的最佳醇提取工艺条件．准确称取已烘干至恒重的淫 羊藿粗粉２００．０ ｇ置于圆底烧瓶中，１８倍量的８Ｏ 乙醇，连接好回流提取装置并置于ＤＬ一１型电子万用炉 上，加热至沸腾，回流提取３次，每次２ ｈ，合并提取液，过滤，减压浓缩，得淫羊藿总黄酮的浓缩液．以芦丁 标准品为对照，采用紫外分光光度法，在５１０ ｎｍ波长处测定其吸光度，得淫羊藿总黄酮的含量． １．４淫羊藿总黄酮对ＣＡＭ血管的影响 鸡胚模型的建立及实验操作参照文献Ｉ５］，将种蛋（３５～４５ ｇ／枚）置于温度３７．５℃、湿度４Ｏ ９／６～６０ 收稿日期：２０１４ ０１ ２１ 基金项目：浙江省自然科学基金项目（ＬＱ１３Ｈ３１０００５）；浙江省教育厅科研项目（Ｙ２０１０１６２６９）；杭州市科技发展计划项目 （２０１００６３３Ｂ１３）；杭州师范大学本科生创新能力提升工程项目（ＣＸ２０１３０７３）；杭州师范大学实验室开放立项项目（ＳＹＳＫＦ２０１３０２８）． 通信作者：刘姬艳（１９７９一），女，讲师，博士，主要从事细胞生物学研究．Ｅ—ｍａｉｌ：ｉｉｕｊｉｙａｎ—ｇｒａｃｅ＠１６３．ＣＯｒｎ ３０６ 杭州师范大学学报（自然科学版） ２０１４矩 ３ 讨 论 抗血管形成是近年来发现的治疗肿瘤的新靶点之一Ｌ７］，也是肿瘤研究领域的一个热点，这一疗法与化 疗相比具有不易诱发抗药性且副作用较轻等优点，已经受到各国学者的重视． 本研究以鸡胚绒毛尿囊膜实验为模型，它是一种经典的血管形成的研究方法，具有实验材料易得、操 作简便、实验周期短及结果易于观察等优点［８ ］，是目前国内使用较多、方法成熟的一种模型．观察中药对 鸡胚尿囊膜局部血管新生的影响，可用以衡量药物影响肿瘤诱生新血管发生或实体瘤组织内血管生成的 能力．本实验结果表明，淫羊藿总黄酮对血管生成有强抑制作用，且这种抑制作用具有明显的剂量依赖关 系，提示抗血管生成可能是它抗肿瘤的途径之一，为后期的内皮细胞增殖和迁移研究提供一定的理论 基础． 生物黄酮与多糖、生物碱同为植物来源的三大天然产品，但与后两者相比，生物黄酮的开发利用较晚， 对其功能的研究和开发远远不够．它广泛存在于各种膳食中，具有众多优良的生理、药理学活性，尤其对心 血管疾病和肿瘤的预防和治疗作用以其天然、低毒、高效的特点而受到关注．希望通过对淫羊藿总黄酮的 药理活性研究筛选出高效低毒的抗肿瘤药物． 参考文献： ［１］赵勇，崔正言，张玲，等．淫羊藿苷对人急性早幼粒白血病细胞分化的影响［Ｊ］．中华肿瘤杂志，１９９７，１９（１）：５３—５５． ［２］毛海婷，张玲，王芸，等．淫羊藿甙抗癌作用机制的实验研究Ｉ－Ｊ］．中药材，２０００，２３（９）：５５４—５５６． ［３］郝炳华，陶明。何立立，等．淫羊藿总黄酮对荷瘤小鼠细胞免疫红细胞免疫功能的影响［Ｊ］．西安医科大学学报，１９９９，２０（３）：３２３—３２５． ［４］张峻颖，黄罗生，陈健，等．淫羊藿醇提工艺研究［Ｊ］．海峡药学，２００４，１６（１）：６２—６３． ［５］张树成，吴志奎，王蕾，等．研究中药血管生成活性和作用的鸡胚绒毛尿囊膜试验模型的应用［Ｊ１．中国中医基础医学杂志，１９９９，５（５） １６—１９． ［６］刘姬艳，胡定慧．苦参总碱对血管生成抑制作用的初步研究［Ｊ］．杭州师范大学学报：自然科学版，２００８，７（６）：４５３—４５５． ［７］Ｆｏｌｋｍａｎ Ｊ．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓｒＪ］．Ｓｅｍｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ，２００３，１３（２）：１５９—１６７． ［８］Ｆｏｌｋｍａｎ Ｊ．Ｔｏｗａｒｄ ａｎ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ：ｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ［－Ｊ］．Ｐｅｒｓｐｅｃｔｓ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ，１９８５，２９（１）：ｉ０—３５． ［９］韩锐．抗癌药物研究与实验技术［Ｍ］．北京：北京医科大学，中国协和医科大学联合出版社，１９９７：３６４． Ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｆｉａｖｏｎｅｓ ｏｆ Ｈｅｒｂａ Ｅｐｉｍｄｉｕｍ ｏｎ Ａｎｔｉ・ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ＬＩＵ Ｊｉｙａｎ ，ＨＵ Ｄｉｎｇｈｕｉ ，ＨＵ Ｆａｎｇｈｕａ ，ＹＥ Ｙｕｈｅ ，ＬＹＵ Ｌｉ ，ＺＨＡＮＧ Ｙｉｍｅｉ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｉ ｉｆｅ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００３６，Ｃｈｉｎａ；２．Ｈｕａｎｇｌａｎｇ Ｍｉｄｄｌｅ Ｓｃｈｏｏｌ Ｌｉａｎｇｓｈａｎ ６１６５５６，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｏｆ Ｈｅｒａ Ｅｐｉｍｄｉｕｍ ａｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｅｔｈａｎｏｌ，ａｎｄ ｉｔｓ ａｎｔｉ—ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｓ ｔｅｓｔｅｄ ｗｉｔｈ ＣＡＭ ａｓ ｔｈｅ ｍｏｄｅ１．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｏｆ Ｈｅｒｂａ Ｅｐｉｍｄｉｕｍ ｉｓ １．６５％，ａｎｄ ｔｈｅ ａｎｔｉ—ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ０．２，０．１ ａｎｄ ０．０５ ｍｇ／ｍＬ ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐｓ ａｒｅ ８１．８ ，５４．５ ａｎｄ ２７．３ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｏｆ Ｈｅｒｂａ Ｅｐｉｍｄｉｕｍ ｈａｖｅ ｃｅｒｔａｉｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ａｎｔｉ—ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｏｆ Ｈｅｒａ Ｅｐｉｍｄｉｕｍ；ｃｈｉｃｋ ｃｈｏｒｉｏａｌｌａｎｔｏｉｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ（ＣＡＭ）；ａｎｔｉ—ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ