９２ ｉ Ｖｏ１．２２．ＮＯ．１ ＣＨＥＭＩＣＡＬ 化学分析计量 ＡＮＡＬＹｓｉｓ ＡＮＤ ＭＥＴＥＲＡＧＥ Ｊａｎ．２Ｏ１３ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８－－６１４５．２０１３．Ｏ１．０２７ 鸡血藤中黄酮类化合物提取工艺的研究 张夏辉。蒋世云。傅凤鸣，崔晓举，黄吉鑫 （广西工学院生物与化学工程系，广西柳州 ５４５００６） 摘要对提取鸡血藤中黄酮类物质的工艺条件进行优选。在单因素考察的基础上，选用４个实验因素（提取温度、 提取时间、料液比、乙醇体积分数）进行３水平正交试验优选，确定提取鸡血藤中总黄酮的最佳工艺参数。４种因素 对鸡血藤中总黄酮提取结果的影响程度由大到小的次序为提取时间、乙醇体积分数、提取温度、料液比。总黄酮最佳 工艺条件：料液比１：３０、乙醇体积分数５０％、提取温度８０￣：２、提取时间３ ｈ，在此工艺条件下，鸡血藤中总黄酮的提取 率为７．７５％。该提取工艺合理，总黄酮提取率高。 关键词鸡血藤；黄酮类化合物；正交试验；提取工艺 中图分类号：０６５８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－６１４５（２０１３）０１－００９２－０３ Ｔｅｃｈｎｉｃｓ ｏｆ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ＥｘｔｒａｃｔｉＯｉｌ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｓｔｅｍ ｏｆＳｐａｔｈｏｌｏｂｕｓ Ｓｕｂｅｒｅｃｔｕｓ Ｄ１１１１１１１ Ｚｈａｎｇ Ｘｉａｈｕｉ，Ｊｉａｎｇ Ｓｈｉｙｕｎ，Ｆｕ Ｆｅｎｇｍｉｎｇ，Ｃｕｉ Ｘｉａｏｊｕ，Ｈｕａｎｇ Ｊｉｘｉｎ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｉｕｚｈｏｕ ５４５００６，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｅｔ Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｏｆ Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｕｓ ｓｕｂｅｒｅｃｔｕｓ ｄｕｎｎ ｗａｓ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ．Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｆｏｕｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｆａｃｔｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｔｉｍｅ，ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｅｅｄ ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｔｏ ｃｏｎｄｕｃｔ ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ３ ｌｅｖｅｌｓ ＳＯ ａｓ ｔｏ ａｓｃｅｒｔａｉｎ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｏｆ Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｕｓ ｓｕｂｅｒｅｃｔｕｓ Ｄｕｎｎ．Ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ４ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｏｆ Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｕｓ ｓｕｂｅｒｅｅｔｕｓ Ｄｕｎｎ ｐｏｗｅｒ ｉｎ ｄｅｓｃｅｎｔ ｏｒｄｅｒ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ，ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｆｅｅｄ ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ３０ ｔｉｍｅｓ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ５０％ｅｔｈａｎｏｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｔ ８０℃ｆｏｒ ３ ｈ．Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｏｆ Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｕｓ ｓｕｂｅｒｅｃｔｕｓ Ｄｕｎｎ ｗａｓ ７．７５％．Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｗａｓ ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ，ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｗａｓ ｈｉｇｈ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗａｓ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｆｅａｓｉｂｌｅ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｕｓ ｓｕｂｅｒｅｃｔｕｓ ｄｕｎｎ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ 鸡血藤为豆科密花豆属植物密花豆的干燥滕 定的，对于苷类物质一般可用丙酮、乙醇、甲醇或一 茎，是一味中国传统活血化瘀中草药。其中的黄酮 些极性比较大的溶剂进行提取，大多数苷元宜用极 类化合物是生理活性物质，具有清除自由基能力，对 性较小的溶剂，如高浓度的乙醇、乙醚、氯仿等有机 于降血压、抗肿瘤和抗衰老等一些疾病有重要的作 溶剂进行提取。甲醇沸点低、有毒，不符合绿色环保 用¨ 。但不经过处理的鸡血藤原药中，总黄酮含量 型理念的工业化生产。笔者选择乙醇为提取溶剂， 只有ｌ％左右，不利于其活性成分的发挥。因此研 浸渍法为提取方法探讨鸡血藤黄酮类化合物的提取 究鸡血藤中黄酮类化合物的最佳提取条件具有重要 工艺条件，旨在寻找提高鸡血藤提取率的方法，也为 意义。 全面开发利用鸡血藤资源提供科学依据。 黄酮化合物的提取是根据相似相容原理进行 １实验部分 的，其过程是黄酮化合物从植物内部向溶剂中转移 １．１主要仪器与试剂 的传质过程 Ｊ。基于这个原理，天然产物有效成分 ７２２光栅分光光度计：７２２型，南京宁博分析仪 的提取方法有浸渍法、热回流提取法、超声波提取法 器有限公司； 等。浸渍法、热回流法等一些传统提取方法，由于仪 循环水式多用真空泵：ＳＨＢ－Ｂ９５Ａ型，郑州长 器设备要求较低，易于推广和转化为工业化生产 。 联系人：蒋世云；Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉｎａｇｓｈｉｙｕｎ＠１２６．ｃｏｍ 提取溶剂的选择，一般是由被提取物的理化性质决 收稿日期：２０１２—１ｌ＿２３ 张夏辉，等：鸡血藤中黄酮类化合物提取工艺的研究 ９３ 城科工贸有限公司； （２）工作曲线方程。 集热式恒温加热磁力搅拌器：ＤＦ一１０１Ｓ型，巩 义市予华仪器有限责任公司； 全自动新型恒温干燥箱：ＺＦＤ－５２５０型，上海智 另取芦丁标准溶液０．０，１．０，２．０，３．０，４．０，５．０ ｍＬ于 ６只２５ ｍＬ容量瓶中，按上述方法定容，得浓度为０， Ｏ．００３ ７５，０．００７５，０．０ｌｌ ３，０．０１５ ０，０．０１８ ８ ｍｇ／ｍＬ的 城分析仪器制造有限公司； 旋转蒸发仪； 鸡血藤、无水乙醇、石油醚、氢氧化钠、铝、 系列标准工作溶液，在５１０ ｎｍ处测定吸光度。以吸 光度为横坐标（ ），以芦丁浓度为纵坐标（】，）进行 线性回归，得回归方程为Ｙ＝０．０４５７Ｘ－０．００４ ５，线性 亚钠：分析纯； 芦丁对照品：纯度９８％； 芦丁标准溶液：０．０９３ ｍｇ／ｍＬ，精确称取芦丁 标准品９．３ ｍｇ，用５０％乙醇溶解，移人１００ ｍＬ容量 瓶用５０％乙醇定容至刻度，摇匀。 １．２实验原理及方法 １．２．１ 测定原理 黄酮类化合物易溶于甲醇、乙醇、稀碱溶液中， 而溶于这些溶剂中的黄酮类物质能与亚钠一硝 酸铝在碱性条件下生成棕红色的络合物，颜色深浅 与黄酮类物质的含量在一定浓度范围内符合比耳定 律。因此通过显色法，以测定鸡血藤提取液中的总 黄酮含量为指标，确定提取黄酮类物质的最佳提取 条件［ ］。 １．２．２测定方法 （１）吸收曲线。 准确移取芦丁标准溶液０．０，２．０，４．０，６．０，８．０， １０．０ ｍＬ于６只２５ ｍＬ容量瓶中，分别加入５％ 亚钠１ ｍＬ，静置６ ｍｉｎ，加入１０％的铝 ｌ ｍＬ，静置６ ｍｉｎ，加入１ ｍｏｌ／Ｌ的氢氧化钠溶液 １０ ｍＬ，用５０％乙醇定容至标线，静置１５ ｍｉｎ，以空 白为对照，在２００～８００ ｎｎｌ范围内进行波长扫描，见 图１。由图ｌ可见，黄酮类物质在５１０ ｎｌＴｌ处有最大 吸收峰。 ３ ２ ｌ Ｏ ２００ ３００ ４００ ５００ ６００ ７００ ８００ Ｘ／ｎｍ ａ￣ｅ质量浓度依次为０．００７ ５，０．０１５０，０．０２２ ５，０．０３００，０．０３７ ５ｍｇ／ｍＬ 图１ 芦丁标准品溶液吸收曲线 相关系数 ＝０．９９８ ７。 （３）样品中黄酮含量测定。 准确称取一定量鸡血藤粉末，用乙醇恒温提 取３ ｈ，将乙醇浸提液用真空水泵抽滤，定容至 １００ ｍＬ容量瓶中作为样品。准确移取ｌ ｍＬ样品 液于２５ ｍＬ容量瓶中，同标准品处理方法，在５１０ ｎｉｎ处测定吸光度，根据回归方程得到黄酮含量 Ｊ。 １．２．３单因素试验 鸡血藤中总黄酮的提取率受很多因素的影响， 选择提取浓度、提取温度、提取时间、料液比和提取 次数５个因素，分别分析它们对黄酮提取率的影响。 准确称取一定量鸡血藤粉末５份，按照１．２．２（３）提 取，然后进行测定。 １．２．４正交试验 为了进一步确定最佳提取工艺，在单因素考察 的基础上，以提取温度、提取时间、料液比、提取次数 为分析因素，以鸡血藤中总黄酮提取率为分析指标， 采用Ｌ （３ ）正交表安排试验，因素和水平见表１。 表１正交试验因素和水平 ２结果与讨论 ２．１单因素试验结果 ２．１．１ 乙醇体积分数 采用不同浓度的乙醇对样品进行提取，料液比 为１：２０，在５０％分别提取１ ｈ，结果显示，随着乙醇 比例的增大，总黄酮提取率逐渐增大，当乙醇体积 分数达到５０％时出现一个最高点，然后又呈下降趋 势。乙醇体积分数对提取率的影响趋势同文献［４］ 一致，这种趋势可能是由于水的比例较大时，会提取 出很多水溶性成分，从而影响了总黄酮的浸出，造成 提取率不高。当乙醇体积分数达到５０％后，由于极 性大、易溶于水的黄酮苷浸出困难，导致黄酮化合 物的提取量下降，这与文献中提到的低浓度醇适合 ９４ 化学分析计量 ２０１３年，第２２卷，第１期 提取苷类相一致¨ ，因此实验选择乙醇体积分数为 ５０％。 ２．１．２提取温度 以５０％的乙醇为提取溶剂，料液比为ｌ：２０，在 不同的温度下分别提取１ ｈ。结果表明，随着温度 升高，提取率逐渐增大，温度达到７０℃后提取率开 始下降，温度对提取率的影响与文献［１０］一致。这 种变化趋势是因为温度升高，分子运动速度加快，渗 透扩散速度加快，黄酮类化合物更容易从细胞中转 移到溶剂中。当温度达到７０￣Ｃ后，黄酮提取含量反 而下降，可能由于黄酮类化合物被氧化破坏所导致， 因此选择提取温度为７０℃。 ２．１＿３提取时间 以５０％的乙醇为提取溶剂，料液比为１：２０， 在７０℃下提取一段时间，分析提取时间对黄酮化 合物提取的影响。随着提取时间的延长，黄酮化合 物的提取率不断增加，超过２ ｈ后黄酮提取率增 长趋势缓慢，考虑节省能耗，确定最佳提取时间为 ２ ｈ。 ２．１．４料液比 以５０％的乙醇为提取溶剂，在７０℃下恒温提 取２ ｈ，分析料液比对黄酮化合物提取的影响。随 着料液比的上升，提取率逐渐增大，到达ｌ：３５之 后，黄酮提取率反而有所下降，因此最佳料液比为 １：３５。 ２．１．５提取次数 以５０％的乙醇为提取溶剂，料液比为ｌ：３５，在 ７０℃恒温提取２ ｈ，分析提取次数对黄酮化合物提 取的影响。当提取次数为２时，黄酮提取率最大，再 增加提取次数，提取率增加不大，所以确定最佳提取 次数为２次。 ２．２正交试验结果 以提取温度、提取时间、料液比、提取次数为分 析因素进行正交试验，正交试验结果见表２。 ２．３影响因素的极差分析 在单因素实验的基础上，通过正交设计实验。 研究结果得到各因素对鸡血藤中总黄酮的提取影 响程度由大到小的次序为提取时间、乙醇纯度、提 取温度、料液比，其中提取时间对鸡血藤中总黄酮 提取率的影响最大，乙醇浓度和提取温度次之，料 液比的影响最弱。本研究表明，提取的最佳方案为 ｋ １８．３０ １７．９８ １９．６１ １８．０２ １９．５６ １８．７５ １８．６９ ２０．２４ １９．８２ ２０．９５ １９＿３８ １９．４２ ． ６．１０ ５．９９ ６．５４ ６．０１ Ｔ＝５７．６８ ６．５２ ６．２５ ６．２３ ６．７５ ＣＴ＝３６９．６６ ６．６１ ６．９８ ６．４６ ６．４７ ０．５１ Ｏ．９９ ０＿３１ ０．７４ 优水平 Ａ３ Ｂ３ Ｃ Ｄ２ ３结语 以乙醇为提取溶剂，采用水浴加热提取法，在 单因素考察的基础上，进行４因素３水平 。（３ ）正 交试验。在最佳提取条件下，鸡血藤中总黄酮提取 率为７．７５％，提取效果理想。 参考文献 ［１］黄新伟，李宝强，王秀华，等．鸡血藤水提物的镇静催眠作用的研 究［Ｊ］．西安文理学院院报，２００９（１２）：６２．６４． ［２］陈晓军．鸡血藤药理作用研究综述［Ｊ］．中国民族民间医药， ２００９（１３）：３－５． ［３］唐勇，何微，王玉芝，等．鸡血藤黄酮类组分抗肿瘤活性的研究 ［Ｊ］．中国实验方剂学杂质，２００７（２）：５１—５４． ［４］Ｄａｖｅ Ｏｏｍａｈ Ｂ．Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ ａｖｔｉｖｉｔｉｅｓ ｉｎ ｂｕｃｋｗｈｅａｔ［Ｊ］．ＪＡ ｃ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｎ，１９６６，４４：１ ７４ ｌ ７５０． ［５］王玫．甘薯叶黄酮类化合物的提取、分离、纯化及其挥发性化学 成分的研究［Ｄ］．长沙：中南大学，２０１０． ［６］刘璐，付明哲，王侠，等．植物黄酮类化合物提取及测定方法研究 进展［Ｊ］ 动物医学进展，２０１１，３２（６）：１５１－１５５． ［７］曾朝珍，吕清卿，赵燕．枸骨叶总黄酮提取工艺的研究［Ｊ］．江苏 农业科学，２００９（４）：３２１—３２３． ［８］刘世民，刘岩．水溶性黄酮类物质比色测定的研究［Ｊ］．粮食加 工．２００４（５）：５８￣６０． ［９］韩秋菊，李薇．黑木耳黄酮类化合物提取工艺研究［Ｊ］．安徽农 业科学，２０１１，３９（２８）：１７２３７—１７２３８． ［１０］蔡碧琼．稻壳黄酮化合物的提取、精制及抗氧化性的研究［Ｄ］． 福建：福建师范大学，２００８．
