胰腺癌组织中survivin表达与临床意义研究

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胰腺癌自I织中Survivin表达与临床意义研究

刘也夫\\ 尚海'，郝志强\\何忠野\\ 张闻辉\\傅熙博\\ 马作红\\ 王坤\\

李文心\\ 李思源\\ 王开宇\\ 焦奥\\何佳垚\\ 韩磊2，宫莉莉3，华向东1

1.中国医科大学肿瘤医院、辽宁省肿瘤医院肝胆胰外科，辽宁沈阳110042;2.北部战区总医院肝胆外科，

辽宁沈阳1丨0016;3北部战区总医院和平院区胸心外科，辽宁沈阳110003

签1 ,[摘要]目的探讨Siirvivhi在人体胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法选取自2014年5月至2015年12月在辽宁 省肿瘤医院接受治疗的33例胰腺癌患者的胰腺组织标本为观察组，另选取33份非肿瘤性胰腺组织标本为对照组。应用免 疫组化S-P法对两组胰腺组织标本中的Survivin表达情况进行检测。结果观察组胰腺组织的Survivin蛋白阳性表达率为 66. 7% (22/33)对照组的胰腺组织未检测到Survivin表达;在观察组中，Survivin表达与肿瘤的临床病理分期、分化程度均存 在显著相关性（厂<〇. 〇5 ) iSurvivin表达与肿瘤部位及大小、患者性别及年龄均无显著相关性（P >0. 05)。结论胰腺癌组织 中的Survivin表达水平与胰腺癌的发生、发展存在密切联系，其对疾病的诊断、预后判定均具有重要意义。[关键词]Survivin;胰腺癌；胰腺组织；表达

中图分类号：K735. 9 |(Un：10. 16680/j. 1671-3826.2019. 12. (wl 文章编号：1671 -3826(2019) 12-丨290名3

王

，

Survivin expression and its clinical significance in pancreatic cancer

WANG Xin,LIU Ye-fu,SHANG Hai,HA0 Zhi-qiang,HE Zhong-ye,ZHANG Wen-liui,FU Xi-l)〇,MA Zuo-hong,WANG Kun,LI Wen- xin,LI Si-yuan, WANG Kai-yu, Jiao-ao, HE Jia-yao,HAN I>ei,G0NG Li-li,HUA Xiang-dong( Department of Hepatobiliary and pan­creatic surgery , Cancer Hospital of China Medical University, Liaoning Cancer Hospital,Shenyang 1 10042 , China)

Abstract ： Objective To investigate the expression of Survivin in pancreatic* cancer and its clinical significance. Methods From

May 2014 to December 2015,33 pancreatic tissue samples from patients with pancreatic cancer treated were divided into the observa­tion group,and 33 non-neoplastic pancreatic tissue samples were divided into the control group. Survivin expression in pancreatic tissue samples of two groups was detected by immunohistochemical S-P method. Results Tlie Survivin expression rate* of pancreatic tissue in the observation group was 66. 1% (22/33) , while Survivin expression was not detected in pancreatir tissue in the control group. In the observation group,Survivin expression was signifK；antly correlated with the clinicopathological stage and differentiation of tumors(P< 0. 05). Survivin expression was not significantly correlated with tumor site and size,gender or age( P >0. 05). Conclusion Survivin expression is closely related to the occurrence and progression of pancreatic cancer, which is of great significance for diagnosis and prognosis of pancreatic cancer.

Key words ： Survivin ； Pancreatic cancer； Pancreatic* tissue； Express

胰腺癌是一种常见的、恶性程度较高的肿瘤， 该病的发病机制目前尚不明确，早期诊断存在较大 难度,预后效果较差，病死率较高M°]。胰腺癌的发 生、进展均是多基因共同参与且表现为多个步骤共 同发生的一个过程，在这个过程中，Survivin为一类 具有重要作用的癌基因，其在细胞分化、肿瘤形成 及转移等过程中均发挥重要作用，在前列腺癌、胰 腺癌、肺癌、乳腺癌等肿瘤组织中均有表达[4]。因

此，加强对Survivin在肿瘤组织中的表达情况进行

深人研究具有重要临床意义。本研究旨在探讨

Survivin在胰腺癌组织的表达情况及其临床意义。 现报道如下。

1对象与方法1. 1研究对象选取自2014年5月至2015年 12月在辽宁省肿瘤医院接受治疗的33例胰腺癌患 者的胰腺组织标本为观察组，其中，男性18例，女 性15例；年龄32 ~ 79岁，平均年龄（47.51 ±2. 31)岁；在对患者实施手术治疗时均切除标本送 检，病理学诊断结果均为胰腺癌;按照KI〇PPd标准 进行组织病理学分级，高分化9例、中分化16例、 低分化8例；在临床分期上，I ~ II期15例，丨丨丨~

IV期18例。另选取33份非肿瘤性胰腺组织标本

第一作者：王鑫（I986-),男，福建长汀人，主治医师，硕士

通信作者:宫莉莉，E-mail:jwgll999@ 163. com;

华向东，E-mail:lnzl_hxd@ 163. com

临床军医杂志 2019 年 12 月第47 卷第 12 期 Clin J Med Offic，Vol. 47,No. 12,Dec,2019• 1291 •

为对照组。本研究经医院伦理委员会批准。1.2研究方法选用由加拿大Neomakers公司提 供的鼠抗人Survivin单克隆抗体，选用由福州迈新 公司生产的S-P试剂盒。一抗工作浓度为1:30,以 已知阳性标本作为阳性对照，以PBS替代一抗作为 阴性对照。整个实验的步骤均以试剂盒说明书作 为参照进行。石蜡切片经过常规性脱蜡水化，使用 浓度为〇. 3%的过氧化氢甲醇液将内源性过氧化氢 酶的活性阻断，然后，将其放入存在柠檬酸盐缓冲 液的枏应容器中，再放置于高压锅中进行加热，加 热到沸腾，促进抗原得到有效修复。将第一抗体 (SUrvivin,l:30)滴入，放置在温度为37丈的环境 中1 h;然后，再滴人生物素标记二抗，同样放置在 37T环境中，放置时间为30 min。将链霉素抗生 物素蛋白-过氧化物酶液滴入，在室温环境下放置 30 min。上述相关步骤实施之间均使用PBS进 行3次洗涤，洗涤时间为每次5 minD DAB-过氧化 氢液室温显色的时间约为5 min。使用苏木素对细 胞核进行复染，然后实施脱水、透明封片及镜检 操作。

1.3检测结果判定将胞浆显示出由淡黄变为棕 黄色判定为Survivin阳性细胞，各例切片阳性结果 均经过影像处理系统进行相关处理。在400倍的 光镜下至少能够清晰观察到5个视野，阳性细胞身 5%判定为阳性，阳性细胞<5%判定为阴性。1. 4

统计学方法采用SPSS 18. 0统计学软件对 数据进行处理。计置资料用均数±标准差U±s)

表示，组间比较采用 < 检验。汁数资料用例（百分 率）表示，组间比较采用/检验。以/\"<〇.〇5为差 异有统计学意义。

- 结果

2.1 Survivin表达分析在免疫组化染色结果上,

Survivin表达阳性染色均表现为定位于肿瘤细胞胞 浆之中，为粗细无•致性的棕黄色颗粒。在33份 正常胰腺组织中均未发现Survivin表达。在33份 胰腺癌组织中，共有22份表现出阳性表达，阳性率 为 66. 7% (22/33)。Survivin 表达情况见图 1、2。

图1 Survivin在胰腺癌组织中高表达图2 Survivin

在癌旁非肿瘤组织中低表达

2. 2 Survivin表达水平与胰腺癌临床、病理学特征 间的相关性及分析 Survivin的表达与患者的年 龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小均不存在显著相关性

(P <0. 05)。Survivin表达与淋巴结转移情况、分化 程度、临床分期均存在密切相关性（P <().〇5 ),且随 着组织分化程度的降低，Survivin的阳性表达率不 断增高。见表1。

表I Survivin表达与胰腺癌临床及病理学特征关系

组別

性别

女性(n = 18)男性U = 15)

年龄

阴性/例

6

阳性/例

阳性率/%

p值1210121013910129134117715

66.766.763.271.465.069.271.463.252.981.344.4

68.8

>0. 05>0.05

5

7

彡55 岁（n = 19)

>55 岁（n = 14)

体尾部（n=2〇)胰头部(71 = 13)

47447

8

肿瘤部位

>0. 05

肿瘤大小

>4cm( n = 14)

^4cm( /} = 19)

>0. 05<0.05

淋巴结转移

有（n = l7)

无(汀=16)高分化(n=9)

355

18

分化程度

中分化(n = 16)低分化U=8)

<0.05

87.546.783.3

<0.05

临床分期

i 〜nu = i5)

ID ~IV(/i = 18)3

• 1292 •临床军医杂志 2019 年 12 月第 47 卷第 12 期 Clin J Med Offic，V〇1.47，N〇. 12，Dec，2019

2.3患者预后情况 33例胰腺癌患者中，1、3、 线粒体Caspase-3结合之后使其活性得到抑制，进 5年的总存活率分别为51_ 5% ( 17/33)、30. 3% (10/33)、3. 0% (1/33)。22 例 Survivin 表达阳性患 者的预后明显差于11例表达阴性的患者，差异有 统计学意义（P <〇.〇5,图3)。

褂蚱刼Survivin 表达 遥

M

_n__n低表达

高表达 —i—f——低表达-删失高表达-删失

0 L-1尸-<------0.001 1--------*-------' w

(3)

0

20

40

60

术后生存时间/月

图3

Survivin阳性表达与阴性表达患者的生存曲线图

3讨论

胰腺癌的发生、进展是一个诸多基因共同参与

的多阶段复杂过程，整个过程均与细胞的凋亡存在

密切关系。Survivin是目前已经发现的最强凋亡抑 制因子之一。有研究显TK, Survivin的组织分布存 在明显细胞选择性，其在正常终末分化组织表现为 低表达或不表达，但在人类各种肿瘤组织中均表现 为广泛表达[5]。细胞凋亡是多细胞生物为了促进 自身稳定得到有效维持、自身细胞增殖及死亡得到 有效调控的一个复杂过程。在成人组织中,Survivin 蛋白分子的分布存在明显特征性。Survivin除了在 胸腺、胎盘中存在微弱表达外，在人体其他正常分 化成熟的组织细胞中往往表现为不表达。与其他 调亡抑制蛋白分布模式相比，Survivin的分布模式 存在明显差异性，处于生理状态下时，其他凋亡抑 制蛋白表现为广泛分布于人体各组织中，各种组织 只是存在不同表达水平。

有研究报道，在细胞凋亡中，核心机制为含半 胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（cysteinyl aspartate

specific proteinase,Caspase)，其主要是通过级联式 激活，同时将蛋白质溶解来决定细胞凋亡形式的变 化…。Survivin 对 Caspase-3 及 Caspase-7 的活性均 有明显抑制作用，对细胞凋亡过程产生阻断作用。 同时，Survivin可以和细胞周期凋亡因子形成新的 复合体，即Survivin-周期蛋白依赖性激酶4，进而使 得P21能够从复合体中得到释放。Survivin通过与

而发挥细胞凋亡阻止作用。所以，Survivin高表达 可对多种因素诱导的细胞凋亡产生抑制作用。此 外,Survivin表达还表现出明显的细胞周期依赖性， 其通常是在G2/M期表现为特异性表达。Survivin 通过与细胞有丝分裂纺锤体中的微管相互结合，直 接参与到细胞基因转录过程中的调节。由此可见,

Survivin的表达和细胞的增殖存在密切联系。有研 究报道，Survivin在肿瘤组织中普遍表现为高表

达[7]。徐孙兵等W的研究结果显示，Survivin在非

肿瘤胰腺组织中无表达，而在55. 75%导管内乳头 状黏液瘤及77. 32%的胰腺导管细胞癌中，Survivin 均表现出高表达。

综上所述，Survivin在胰腺癌组织中表现为高 表达，且其表达水平与胰腺癌的发生、发展存在显 著相关性，对胰腺癌早期诊断及患者预后判定均具 有重要意义。

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(收稿日期:20丨8*07-13)

细