・制剂与技术・ ２０１１年１月第８卷第３期 正交设计优选活络健骨胶囊的提取工艺 雷黎明 ，王先教 ，周家茂 ，胡志祥 ，蒋云凯 ，呙爱秀 （１．湖南环境生物职业技术学院药学系，湖南衡阳４２１００１；２．湖南省衡阳市药品检验所，湖南衡阳４２１００１） 【摘要】目的：优选活络健骨胶囊剂的最佳提取工艺条件。方法：采用正交试验对活络健骨胶囊剂的醇提工艺进行优化， 以高效液相色谱法测定样品中芍药苷的含量。结果：活络健骨胶囊剂的最佳醇提取工艺条件为Ａ：Ｂ，Ｃ２Ｄ ，即用８倍量 ８０％的乙醇回流提取２次，每次１ ｈ。结论：本实验为活络健骨胶囊剂的生产工艺提供了科学的依据。 【关键词】活络健骨胶囊剂；正交试验；提取工艺；芍药苷 【中图分类号】Ｒ２８４．２ 【文献标识码】Ａ 【文章编号］１６７３—７２１０（２０１ １）０１（ｃ）一０６４—０２ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ Ｈｕｏｌｕｏ Ｊｉａｎｇｕ Ｃａｐｓｕｌｅｓ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏ－ ｎａｌ ｔｅｓｔ ＬＥ／Ｌｉｍｉｎｆ，ＷＡＮＧ Ｘｉａｎｊｉａｏ２，ＺＨＯＵ Ｊｉａｍａｏ１，ＨＵ Ｚｈｉ％ ，ＪＩＡＮＧ Ｙｕｎｋａｇ，ＧＵＯ Ａｉｘｉｕｌ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｈｕ ｎａｎ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ—Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ，Ｈｅｎｇｙａｎｇ ４２１００１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｈｅｎｇｙａｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｈｅｎｇｙａｎｇ ４２１００１，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｒ ｆｔｈｅ ａｌｃｏｈｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｅｏｎｉｌｆｏｒ ｉｎ Ｈｕｏｌｕｏ Ｊｉａｎｇｕ Ｃａｐｓｕｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ： Ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐａｅｏｎｉｌｏｒ ｃｏｎｔｅｎｔｆ ａｓ ｉｎｄｅｘ，ｏ￣ｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｆａｃｔｏｒｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｈｅ ｅｏｎｃｅｎｔｒａ—ｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌ，ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ａｌｃｏｈｏ１．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｐｒｏｃｅｓｓ Ｗａｓ ８ ｔｉｍｅｓ ｏｆ ８Ｏ％ａｌｃｏｈｏｌ，ｅｘｔｒａｃｔ— ｉｎｇ ２ ｔｉｍｅｓ ａｎｄ １ ｈｏｕｒｓ ｅａｃｈ ｔｉｍｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｉｓ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ｓｔａｂｌｅ ａｎｄ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｅｏｎｉｌｆｏｒ ｏｆ Ｈｕｏｌｕｏ Ｊｉａｎｇｕ Ｃａｐｓｕｌｅｓ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｈｕｏｌｕｏ Ｊｉａｎｇｎ Ｃａｐｓｕｌｅｓ；Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ；Ａｌｃｏｈｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；Ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒ 活络健骨胶囊由青风藤、海风藤、白芍、骨碎补、乳香、没 药、全蝎、蜈蚣、土鳖等１８味中药组成。处方系治疗风湿关节 病的师传经验秘方，经３０多年ｌ临床实践，吸收现代医学新成 １．２试药 实验用各味药材购自衡阳市民生堂大药房，均经衡阳市 药品检验所王先教副主任药师鉴定；芍药苷对照品（中国药品 生物制品检定所，供含量测定用，批号：１１０７３６—２００５２５），乙腈 果．不断总结与改进，形成被临床许多病例验证取得满意疗效 的复方制剂。它不仅对风湿性关节炎疗效较佳，对腰腿痛、坐 骨神经痛、肌肉病变、骨质增生、股骨头坏死及骨外伤也均有 （色谱纯，天津市科密欧化学试剂厂），磷酸（分析纯），水为自 制超纯水，其他试剂均为分析纯。 ２方法与结果 较好疗效『１１。药理实验证实其具有良好的抗感染消肿阁与镇痛 作用嘲，对大鼠佐剂性关节炎中白细胞介素６及前列腺Ｅ 的 生成有显著抑制作用 。活络健骨胶囊中青风藤和白芍的用药 量最大，是该药处方中的主药，根据我们的相关研究［５－６１，本实 ２．１提取溶媒和因素水平的选择 白芍的主要成分为芍药苷，易溶于乙醇，故选乙醇为提取 溶剂。根据药材性质和生产实际，本实验选取了对提取率影响 验选择芍药苷作为含量测定的指标，采用正交设计试验对活 络健骨胶囊中醇提取的中药的提取工艺进行优化筛选［７－８］，为活 较大的溶媒加入量（Ａ）、溶媒浓度（Ｂ）、提取次数（Ｃ）、提取时 间（Ｄ）４个主要因素作为考察因素，每个因素拟３个水平，以 络健骨胶囊的制备工艺提供了参考依据。 １仪器与试药 １．１仪器 芍药苷的提取率作为考察指标，具体因素水平见表１。 表１因素水平表 Ｔａｂ．１ Ｆａｃｔｏｒｓ ｅｔｈａｎｏｌｉｃ Ｉｅｖｅｌ ｔａｂｌｅ 高效液相色谱仪：Ｗａｔｅｒｓ ７１７高效液相色谱仪；检测器： Ｗａｔｅｒｓ ２４８７双波长紫外检测器；Ａｇｉｌｅｎｔ ＳＢ Ｃ１８柱；ＨＳ２０００色 谱数据工作站（杭州英谱科技开发有限公司）；台湾艾柯纯水 机：Ｍｅｔｔｌｅｒ ＡＧ１３５电子分析天平：ＫＱ一５００ Ｅ型超声波清洗机 （昆山市生物科技有限公司）；回流提取装置（天津玻璃仪器 厂）；旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；酒精浓度测定仪（河 北省河间市宏利仪表厂）。 【基金项目】湖南省教育厅科研课题（项目编号：０９Ｃ１ Ｊ５２）。 【作者简介】雷黎明（１９６５－），男，汉族，湖南安乡人，本科学历，副教授；研 究方向：中药及天然药物化学 ２．２供试溶液的制备 按处方比例称取白芍等药适当破碎，置回流装置内，以乙 醇为提取溶剂回流提取至规定时间后，倒出提取液，药渣用少 量乙醇冲洗，合并提取液，适量浓缩，滤过并定容至１ ０００ ＩＩＩｌ，备 ６４巾国医药导掘ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ ２０１１年１月第８卷第３期 ・制剂与技术・ 用。 ２．３芍药苷的测定 由表２中极差值的大小可以看出，各因素主次为Ｃ＞Ａ＞ Ｂ、Ｄ，即提取次数的影响大于提取乙醇量的影响，后者又大 于乙醇浓度和提取时间的影响。方差分析结果表明，提取次 数的影响最大，但在实验水平上的影响差异均无统计学意 ２．３．１色谱条件Ａｇｉｌｅｎｔ ＳＢ Ｃｌ８（４．６ ｍｍ￣２５０ ｍｍ，５ Ｉｘｍ）色谱 柱，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温：３０℃；流速１．４ｍｌ／ｍｉｎ； 流动相：乙腈一０．１％磷酸溶液（１３：８７）；检测波长：２３０ ｉｌｍ。进 样量：ｌＯ Ｉｘ］；理论板数按芍药苷峰计算应不低于２ ０００。 义。由表２中各值的大小结合其他各项指标，发现其他各项 指标差异均较小，所以选择Ａ：Ｂ，Ｃ Ｄ 为最佳提取工艺，即用 ２．３．２对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品适量．加甲 醇制成每毫升含６７．６ Ｉｘｇ的溶液，即得。将对照品溶液置于 冰箱（４￣Ｃ）中保存，备用。 ２－３．３线性关系考察精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制 ８倍量８０％的乙醇回流提取２次，每次１ ｈ ２．５最佳提取工艺验证 按处方比例分别称取白芍等药材适当破碎，按确定的提 取时间、乙醇浓度、提取次数、加入乙醇量进行提取，平行实 成浓度分别为１５．８６、３１．７２、４７．５８、６３．４４、７９．３０、９５．１６ ｇ／ｍｌ 的溶液，分别精密吸取上述各对照品溶液１０ ｌ，注入液相色 谱仪，测定色谱峰面积。以对照品溶液进样量（ ｇ）为横坐标， 峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程ｙ＝１．９７ｘ １０叼＋２．９２ｘｌＯ （ｒ：０．９９９ ７）。结果表明芍药苷进样量在０．１６～ ０．９５ Ｉｘｇ范围内与峰面积呈良好的线性关系。 ２．３＿４样品含量测定精吸取滤液２Ｏ ｌ，经０．４５ ｍ的微孔 滤膜滤过，按《中国药典１２００５年版ＨＰＬＣ法分别测定色谱峰 面积，计算样品中芍药苷的含量。 ２．４正交设计结果 ２．４．１ Ｌ９（３ ）正交试验按表ｌ选取的因素水平。选用Ｌ９（３ ） 进行正交试验．结果见表２。 表２正交试验设计表及结果 Ｔａｂ．２ Ｏ￣ｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔａｂｌｅ ２．４．２方差分析 结果见表３。 表３方差分析表 Ｔａｂ．３ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ 验３组，结果见表４。实验表明，用最佳工艺条件芍药苷的提 取率均高于其他各正交试验值，故本最佳工艺条件合理，同 时也表明此工艺具有较好的稳定性 表４最佳工艺验证试验 Ｔａｂ．４ Ｔｅｓｔ ｏｆ ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｐｔｉｍｕｍ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３讨论 活络健骨胶囊中白芍和青风藤的用量最大，是该药处方 中的主药，因此本研究选择芍药苷作为含量测定的指标．采 用正交设计的方法对活络健骨胶囊的提取工艺进行优化筛 选，各因素对芍药苷含量的影响顺序依次为提取次数、提取 乙醇量、乙醇浓度、提取时间，最佳提取条件为Ａ２Ｂ Ｃ２Ｄ ，即 用８倍量８０％的乙醇回流提取２次，每次１ ｈ。在供试品的制 备过程中，采用了比较成熟的回流提取方式，该提取工艺具 有操作简便，稳定性好、芍药苷得率高等优点。试验中确定的 工艺条件科学、合理、可行，为制订活络健骨胶囊的制备工艺 提供了参考依据。 【参考文献】 ［１】周家茂，吴石头．复方活络健骨胶囊治疗坐骨神经痛５８例临床研究 ． 中华实用医药杂志。２００５．５（１ １）：１０７７． 【２］周家茂，严奉祥，全建设，等．活络健骨胶囊抗炎效应的实验研究ｆＪ］．中 国医师杂志．２００６，８（５）：６３１． 【３】周家茂，严奉祥，全建设，等．活络健骨胶囊镇痛试验的药效学研究ｆＪ１． 中国中医药信息杂志。２００６。ｌ３（４）：２５． ［４］周家茂，严奉祥，雷黎明，等．活络健骨胶囊对大鼠佐剂性关节炎的抗炎 免疫效应ｌＪ］．中国』临床康复，２００６，１０（２７）：４８． 【５】雷黎明，王先教，周家茂，等．活络健骨胶囊质量标准研究『Ｊ］．中国医药 导报．２００８．１６（５）：３８． ［６】张蜀，邓红，林华庆，等．夜热清颗粒中牡丹皮的提取工艺研究ＩＪ１．中国 医药导报。２００８．２１（５）：３８． （７］张平，刘志辉，刘汉清，等．ＨＰＬＣ’测定血府逐瘀合剂中芍药苷的含量『Ｊ１． 中成药 ２００８．２（３０）：２８５． ［８］雷黎明，王先教，周家茂，等．活络健骨胶囊中芍药苷成分的测定方法研 究 ．湖南环境生物职业技术学院学报，２０１０，１６（２）：２５． （收稿Ｅｌ期：２０１０—１ １－２９） ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ巾国医药写报６５
