・基础研究・ 2011年1月第49卷第2期 塞来昔布对大鼠慢性非细菌性前列腺炎的血清IL-8影响及病理学观察术 黄伟 陈晓明:郑聪 赵益华 李兴华 陈建武 陈晓军 (1.温州医学院附属乐清医院泌尿外科,浙江温州325600;2.温州医学院生物教研室,浙江温州325600) 【摘要】目的观察塞来昔布对慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型的血清IL一8影响及病理学变化。方法选择40例SD大鼠, 分为4组,1组作为对照组,其余3组建立慢性非细菌性前列腺炎模型,按组别分别给予生理盐水(O.5mlJl0Og)和不同剂量 的塞来昔布(2m ̄lOOg,4mg/100g),连续治疗4周。比较大鼠体重增长、前列腺湿重与脏/体比值以及血清II,-8水平的变化。 结果与炎症模型组比较,塞来昔布组大鼠体重明显增加,前列腺湿重与脏/体比值以及血清IL一8水平明显下降,差异有统 计学意义(P<0.05),不同剂量塞来昔布组问无明显差异。结论塞来昔布能够降低慢性非细菌性前列腺炎大鼠的血清IL一8 水平,减轻前列腺炎症反应,为临床合理用药提供依据。 【关键词】塞来昔布;前列腺炎;白介素一8;病理学;大鼠 【中图分类号】R697.33 [文献标识码】A 【文章编号】1673—9701(201 1)02—06—02 Observation of Celecoxib on Serum IL-8 and Pathology iII Rat with Chronic Non-bacterial ProstatitjS HUANG Wei CHEN YAaoming ̄ZHENG CongI ZHAO Yihua LI Xinghua CI-IEN dianwu CHEN X/aojU// 1.Department of Urology,Yueqing Hospital Affiliated of Wenzhou Medical College,Wenzhou 325600,China;2.Department of Biology, Wenzhou Medical College,Wenzhou 325600,China 【Abstractl Objective To observe the change of selqlm IL一8 and pathological changes in chronic non-bacterial prostatitis rat model by celecoxib Methods There were 40 cases of SD rats were divided into four groups,one as the control group,the other three roups tgo establish chronic non—bacterial prostatitis rat mode1.These three groups were given normal saline(O.5mlJl00g)and difer— ent doses of celecoxib(2mg/lO0g,4mg/100g),continuous treatment for 4 weeks.Comparison of body weight,wet wel。ght of prostate and prostate weighffmouse weight and seFum II 一8 levels were observed.Results To inflammation model group,the celecoxib group were signiicantfly increased body weight,wet weight of prostate and prostate weight/mouse weight and serum IL-8 levels were signiicantfly decreased.The diference was significant(P<0.05).Diferent doses of celecoxib was no signiifcant diference between groups.Conclu— sion Celecoxib can make chronic bacterial prostalitis in rats decreased serum levels of IL一8,prostatitis inflammatory reaction reduced,to provide the basis for clinical treatment. 【Key words1 Celecoxib;Prostatitis;Interleukin-8;Pathology;Rat 前列腺炎是男性泌尿生殖系统常见病,约50%的男性在一 生巾曾有前列腺炎的症状l】】,是泌尿外科门诊最常见的疾病之 一10只,BCD组30只,共4个组,A组为对照组,其余3组为炎症 组。 ,约占门诊就诊人数的8%~25%ft,21,其中慢性非细菌性前列腺 1.2动物模型的建立 炎占90%以上㈣。临床研究表明,选择性COX一2抑制剂能缓解慢 按照魏武然[61等办法,A组10只SD大鼠作为对照组,仅每 日皮下注射生理盐水lmL,共30d;BCD组3O只SD大鼠作为炎 症组,经2%戊巴比妥钠(45mg/kg)腹腔注射麻醉,手术去势,皮 下注射苯甲酸雌二醇(上海通用药业)0.25mg/kg,共30d,成功建 立大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型。 1.3用药方法 性非细菌性前列腺炎的症状,降低NIH—CPSI评分 ,但是国内 尚未见分子生物学水平和组织病理学方面进行的基础研究。为 了从基础层面研究其病因与发病机制,我们通过建立慢性非细 菌性前列腺炎动物模型并给药的方法,试图探讨其作用机制以 及治疗的有效性、合理性。 1.3.1药物选择采用选择性环氧化酶一2(cox一2)抑制剂塞来 1 资料与方法 1.1 实验动物及分组 昔布(辉瑞制药),使用时以生理盐水配制成所需浓度的悬浊液 (10mg/mL生理盐水)。 雄性SD大鼠40只,8周龄,体重210~250g,随机分为A组 浙江省温州市医药卫生科研项目,编号:2009B085 1.3,2给药方法模型成功建立后,按照A组(对照组)生理盐 水0.5mL/100g体重,B组(炎症模型组)生理盐水0.5mL/100g体 6中国现代医生CHINA MODERN DOCTOR 2011年1月第49卷第2期 ・基础研究・ 重,C组(塞来昔布低剂量组)塞来昔布2mg/lO0g体重,D组(塞来 昔布高剂量组)塞来昔布4mg/lOOg体重的方法,将药物溶解于生 2.3血清IL一8检测 炎症模型组血清IL一8水平较对照组、塞来昔布不同剂量组 理盐水后以上述组别和剂量通过灌胃方式给药,每日1次,总共4N。 1.4标本采集 4周后称出大鼠体重,眼球采血法采取血标本,测定血清白 介素一8(IL一8)含量;脱颈椎法处死大鼠,手术完整取出大鼠前列 腺组织并称湿重,制取前列腺病理切片,光镜下进行组织病理学 观察。 1.5观测指标 1.5.1前列腺脏/体比值完整摘取大鼠前列腺组织,分析天平 称湿重,并与大鼠体重作比值,单位为mg/g。 1.5.2病理学观测前列腺组织放置于10%福尔马林液固定, 24h后沿前列腺长轴作冠状面取材,石蜡包埋,切片厚度 2-3 m,苏木精一伊红染色,由本院病理科协助观测。 1.5.3血清IL一8测定 采用双抗体夹心ELISA法测定血清 IL一8含量,试剂盒由上海西塘生物科技有限公司提供,操作严格 按照试剂盒说明书进行,使用奥地利Anthos 2010全自动酶标 仪,由本院实验室协助测定。 1.6统计学方法 计量资料以( 4-s)表示,两组均数比较采用t检验。P<O.05 为差异有显著性。 2结果 2.1大体形态学变化 炎症模型组(B组)大鼠体重增长较缓慢,4周后其体重增长 明显小于其它各组,前列腺湿重与脏/体比值大于其它各组(P< 0.05);塞来昔布组(C组与D组)体重增长较炎症模型组为快,差 异明显(P<0.05),比对照组增长稍慢,但差异无显著性(P> 0.05),与对照组相比,在前列腺湿重及脏/体比值方面有明显差 异(P<0.05);塞来昔布不同剂量组之间比较,在大鼠体重增长、 前列腺湿重与脏/体比值方面均无明显差异(P>0.05)。见表1。 表1大鼠给药前后体重增长、前列腺湿重与脏,体比值变化情况 ( 4-s,n=10) 注:与各组比较具有统计学意义( P均<0.05),与对照组比较具有 统计学意义( P均<0.05) 2.2前列腺病理学观测 与对照组比较,炎症模型组大鼠前列腺组织被膜增厚,腔内 皱襞消失,可见少量腺泡破坏,间质明显肿胀、模糊,有大量淋巴 细胞、单核细胞浸润及浆细胞分布,前列腺纵隔内平滑肌细胞和 结缔组织大量增生,可见血管扩张及充血现象。而塞来昔布不同 剂量组镜下所见类似,较验证模型组明显改善,被膜未见明显增 厚,腺泡完整,内见嗜酸性分泌物,仅见部分腺泡皱襞减少或消 失,间质偶见肿胀,少量炎症细胞浸润,前列腺纵隔内平滑肌细 胞及结缔组织少见,无明显血管扩张及充血现象。 均明显升高,差别有显著性(p<O.05),而塞来昔布不同剂量组、 对照组之间互相比较,差别无统计学意义(P>0.05)。见表2。 表2各组大鼠血清I L_8水平( 4-S) 注:与其他组比较具有统计学意义( P均<O.05) 3讨论 慢性非细菌性前列腺炎病因复杂,发病机制未明,目前认为 其主要病因可能是病原体感染、炎症和异常的盆底神经肌肉活 动等的共同作用F,sl。有研究提示,免疫反应导致的细胞因子在前 列腺炎发病过程中起着重要的作用 ol,其中研究较多的IL一8已 被证实在慢性非细菌性前列腺炎的血清及前列腺液中均有不同 程度的升高l1】]。细胞因子通过促进趋化因子和诱导环加氧酶一2 (COX一2)基因以及其他酶和分子的表达,导致炎症局部COX一2 合成增多,从而使细胞产生大量前列腺素E2tJ2,Jz/。COX一2是催化 花生四烯酸转变为前列腺素(PGs)和其他类前列腺物质的限速 酶,研究证实,COX一2 mRNA在前列腺中含量最高,COX一2对炎 症中的PGs释放非常重要,是炎症过程中的一个重要的诱导酶 选择性COX一2抑制剂具有抑制COX一2活性、阻断炎症介 质形成、减少组织问炎症细胞浸润的作用。本组动物实验研究提示 塞来昔布治疗大鼠慢性非细菌胜前列腺炎有效,能使患有前列腺 炎的大鼠体重恢复,局部前列腺炎症反应减轻,镜下可见大鼠前列 腺腺体病变、间质改变、炎症细胞浸润及纤维组织增生等情况获 得改善。患有前列腺炎的大鼠血清中IL_8水平增高,可见IL一8 过度表达,可能在导致前列腺组织出现病理改变过程中起到一定 作用,证明细胞免疫因素在慢性非细菌性前列腺炎病变过程中 起到不可忽视的作用,因此IL~8升高对于慢性非细菌性前列腺炎 具有一定的筛选诊断价值,有望成为辅助诊断慢陛非细菌『生前列腺 炎的实验室指标。塞来昔布能够下调大鼠前列腺炎模型中IL一8 的表达,可能通过抑制炎症反应及免疫调节等方面达到治疗 U 腺炎、改善症状及抑制病变进展。我们研究中分另 使用2mg/100g体重 与4mg/100g体重两种剂量塞来昔布抑制大鼠前列腺炎的作用,其 结果应用统计学检验无显著性差异,表明2mg/lOOg体重的用量 能达到治疗目的,为临床使用选择眭COX一2抑制剂治疗慢性非细 菌f生前列腺炎的用量选择提供了一定的参考依据。 在中华泌尿外科学会发布的《前列腺炎诊断治疗指南》中, 非甾体抗炎镇痛药被推荐为慢性非细菌性前列腺炎的经验性用 药,塞来昔布作为最新的非甾体抗炎药的一种,是首先应用于临 床的特异性COX一2抑制剂,其具有更高的选择性和更低的胃肠 道反应,国内少数文献报道,其能缓解慢性非细菌性前列腺炎的 症状,降低NIH—CPSI评分[4.51。我们利用大鼠慢性非细菌性前列 腺炎模型,通过观测细胞因子与前列腺病探讨塞来昔布对于前 (下转第11页) CHINA MODERN DOC_『.oR中国现代医生7 2011年1月第49卷第2期 ・临床研究・ 手术的应激,使机体的分解代谢增加,氮丢失明显,且较长时间 不能进食,因此胃癌术后的营养支持对促进患者尽早康复和降 低术后并发症,改善患者的预后具有极其重要的作用。营养支持 能改善患者的营养状态,纠正水、电解质紊乱,提高患者对手术 者易出现腹胀等情况,但是经过调整滴速或加热后,患者均能耐 受。因此,临床在应用过程中,也要注意副反应,并及时解决。 总之,胃癌术后应用肠内营养,效果理想,能有效调节血清 中IL一6的表达,对疾病恢复有重要意义,临床可以推广应用。 【参考文献】 【1]Bower M,Jones W,Vessels B,et a1.Nutirtional support with endolu— minal stenting during neoadjuvant therapy for esophageal malignancy[J]. Ann Surg Oncol,2009,16(1 1):3161—3168. 治疗的耐受性,改善机体免疫功能 。IL一6是一种由184个氨基 酸残基组成的糖蛋白,由淋巴细胞与多种非淋巴细胞分泌产生, 是B细胞终末分化因子,可诱导B细胞克隆、活化、增殖T细胞, 并增强NK细胞杀伤靶细胞的能力。在肿瘤病理环境下,较高表 达的II,-6可引起肿瘤边缘组织及机体的整体损伤。相关研究表 明,I卜6在胃癌中高表达,可能对术前确诊及判断预后等有关 。 本实验对胃癌术后患者应用肠内和肠外营养分别进行治 疗,结果显示观察组与对照组营养质量差别无统计学意义,但是 观察组术后排气及排便时间均明显短于对照组,提示肠内营养 能达到与肠外营养相同的效果,且能改善排气和排便时间,临床 中可以积极应用。虽然肠外营养支持使胃切除患者有了营养保 障,疗效确切,但长期使用会发生感染,加重肝脏的负担、胆道系 统胆汁淤积,以及由于缺乏食物纤维对肠道的刺激,导致肠道黏 [2】李丽,姚志清,王蓓,等.两种肠内营养途径在口腔癌患者早期肠内 营养的应用比较『J1.现代临床护理,2009,8(12):4—6. [3]杨景峰,林越,薄巨双,等.肠内营养在胃癌全胃切除术后的应用研 究[J1.中国现代医生,2009,47(12):4(】_41. [4]李萍,周春刚,张志斌.胃癌患者IL一6与CEA和CA19—9测定的临 床意义【J1.检验医学与临床,2009,6(17):1413—1414. 【5】吴旭东,梁继刚,田萌子.肠内与肠外营养支持改善老年胃癌患者术 后机体状况的对比lJJ.实用医药杂志,2008,25(10):1186一l187. [6】Makeeva TK,Galkin AA.Nutritional support in the treatment of gas.一 膜萎缩、肠黏膜通透性增加和肠道免疫功能障碍等。而肠内营养 具有如下优点:①可减少内毒素释放与细菌易位;②促进胃肠道 蠕动与胆囊收缩,恢复胃肠道正常蠕动,减轻肠粘连;③并发症 少;④有利于肝脏的蛋白合成 q。因此临床应用肠内营养更理 想。实验结果还显示,观察组治疗后血清中IL一6的下降更明显, 由于IL一6是促炎性发生的细胞因子,而肠内营养能明显降低其 血清表达,提示其可能对调节术后的炎性反应有重要价值。胃癌 是多重基因损伤的复杂过程,肿瘤细胞的增殖、浸润的过程中, 可以产生和分泌大量内源性IL一6,进而促进损伤。因此,肠内营 养于术后能有效降低IL一6,对减少肿瘤的损伤及抵制炎症反应 有重要价值。但是我们也注意到,在应用肠内营养过程中部分患 (上接第7页) 列腺炎的作用和机制,为临床使用COX一2抑制剂治疗前列腺炎 tric cancer[J].Vopr Onkol,2009,55(2):237—2340. [7】赵良淑.胃癌术后经鼻肠管早期肠内营养支持79例临床护理[J].齐 鲁护理杂志,2009,15(22):10—11. [8】周春红,蒋茜,盛月华,等.胃癌患者血清TNF、IL一2、IL一6检测fJ1.齐 齐哈尔医学院学报,2009,30(18):2237—2238. [9】王明俊,潘裕国,卫智强,等.老年胃癌患者术后肠内营养与肠外营 养支持的效果比较[J】_山东医药,2009,49(45):9O一91. 【1O]曹水江,蒋清华,方子兴.胃癌术后肠内营养和全胃肠外营养的疗 效比较『J】.中国现代普通外科进展,2009,12(10):907—908. (收稿日期:2010—09—05) controlled,double--blind study of pelvic electromagnetic therapy for the treatment of chronic pelvic pain syndrome with 1 year of fol— 提供初步依据。 【参考文献】 [1】Krieger JN,Riley DE,Cheah PY,et a1.Epidemiology of prostatitis: new evidence for a world—wide problem[J].World J Urol,2003,2:70—74. [2]Rizzo M,Marchetti F,Travaglini F,et a1.Prevalence,diagnosis and lowup[J].J Urol,2005,173(6):2044-2047. [8]胡小朋,白文俊,朱积川,等.慢性前列腺炎细菌及免疫学研究lJl_中 华泌尿外科杂志,2002,23(1):29—31. [9]Razumov SV,Medvedev AA,Chirun NV,e1.8/.Role of cytokines in the diagnosis of chronic prostatitis[J].Urologia,2003,6:25-28. [10】Orhan I,Onur R,Ilhan N,et a1.Seminal plasma cytokine levels in he ditagnosis of chronic pelvic pain syndrome lJJ.Int J Urol, 2001,8:495—499. treatment of prostatitis in Italy:a prospect!re urology outpatient prac— tice study[J].Br J Urol Int,2003,92:955-959. 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