・４６４・ 齐鲁药事・Ｑｉｌｕ ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＡｆｆａｉｒｓ ２０１２ Ｖｏ１．３１．Ｎｏ．８ ＨＰＬＣ法测定异山梨醇的含量 王飞龙 ，赵海桥 ，刘存领 ， （１．山东方明药业集团股份有限公司，山东菏泽２７４５００；２．山东大学药学院，山东济南２５００１２） 摘要：目的建立高效液相色谱法测定异山梨醇含量。方法 色谱柱为Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ。 （４．６ ｍｍ ｘ ２５０ ｍｍ，５ ｍ），流 动相为甲醇一水（５０：５０），流速为１．ｏ ｍＬ・ｍｉｎ～，ＥＬＳＤ载气流速为２．５ ｍＬ・ｒａｉｎ～，检测器飘移管温度为３Ｏ℃。结果 异山梨醇在１００—３００ Ｉｘｇ・ｍＬ 浓度的对数与峰面积对数有良好的线性关系（Ｒ。＝０．９９９ １，ｎ：５），且该方法的平均 回收率为９９．８％，ＲＳＤ为０．０８％（ｒｔ＝９）。结论该方法简便，结果准确，可用于异山梨醇含量的测定。 关键词：异山梨醇；含量测定；高效液相色谱法 中图分类号：Ｒ９２７．２文献标识码：Ａ文章编号：１６７２—７７３８（２０１２）０８—０４６４—０２ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｓｏｓｏｒｂｉｄｅ ｂｙ ＨＰＬＣ ＷＡＮＧ Ｆｅｉ．１ｏｎｇ ，ＺＨＡＯ Ｈａｉ ｑｉａｏ ，。ＬＩＵ Ｃｕｎ．１ｉｎｇ Ｉ。 。（Ｊ．Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｆａｎｇｍｉｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｈｅｚｅ ２７４５００，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｌｎａｎ ｆ２５００１２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａｎ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉＳＯＳＯｒｂｉｄｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｗａｓ ｃａｒｉｒｅｄ ｏｕｔ ｏｎ Ｋｒｏｍｓｉｌ Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ（４．６ ｍｍ ｘ２５０ ｍｍ，５ ｍ）．Ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ｍｅｔｈａｎｏｌ—ｗａｔｅｒ（５０：５０）ａｔ ｔｈｅ ｌｆｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ１．０ ｍＬ・ｒａｉｎ～．Ｔｈｅ ｌｆｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｒｒｉｅｒ ｇａｓ（ＥＬＳＤ）ｗａｓ ２．５ ｍＬ・ｍｉｎ～．Ｔｈｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ｄｒｉｔｆ ｔｕｂｅ ｗａｓ ３０ ℃．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｉｓｏｓｏｒｂｉｄｅ ｗａｓ ｌｏｏ一３ｏ０ ｇ・ｍＬ （Ｒ ＝０．９９９ １，ｎ＝５）．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９９．８％ ａｎｄ ｔｈｅ尼 ｗａｓ ０．０８％（ｎ＝９）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｉｔ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｓｏｓｏｒｂｉｄｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｉｓｏｓｏｒｂｉｄｅ；Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ＨＰＬＣ 本品是山梨醇的脱水衍生物，为一口服渗透性脱水利尿 药，作用机制类似于静注甘露醇和山梨醇。通过提高血浆渗 ２．１色谱条件５ 色谱柱为Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃｌ８柱（４．６ ｍｍ×２５０ ｍｉｌｌ， ），流动相为甲醇一水（５０：５０），流速为１．０ ｍＬ・ｍｉｎ～。 透压，导致组织内（包括眼、脑、脑脊液等）水分进入血管内， 从而减轻组织水肿，降低眼内压、颅内压和脑脊液容量及其 压力。用于治疗脑水肿及青光眼。 ＥＬＳＤ载气流速为２．５ ｍＬ・ｍｉｎ～，检测器飘移管温度为３０ ℃，室温为２５℃。 ２．２对照品溶液的制备取异山梨醇对照品约４０ ｍｇ，精密 国家药品标准ＷＳ一４６４（Ｘ一３９９）一９５采用旋光法测 定。由于异山梨醇结构中没有发光官能团，没有紫外吸收， 称定，置２０ ｍＬ容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为 对照品储备液（２．０００ ０ ｍｇ・ｍＬ ）。精密量取对照品储备 液１ ｍＬ置１０ ｍＬ量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得 异山梨醇对照品溶液。 无法用紫外检测器进行检测，而本法采用蒸发光散射法进行 检测。 １仪器与试药 ２．３样品溶液的制备 精密称定异山梨醇样品，加流动相 １．１ 仪器１０００。 检测器为蒸发光散射检测器，型号为ＥＬＳＤ一 稀释制成每１ ｍＬ含异山梨醇０．２ ｍｇ的溶液。 ２．４线性关系考察精密量取上述对照储备液１．０、１．５、 ２．０、２．５、３．０ ｍＬ，分别置２０ ｍＬ容量瓶中，用流动相稀释至 ３０００，通微（上海）分析技术有限公司，液相泵为ＫＮＡＵＥＲ一 １．２试药异山梨醇对照品（山东方明药业集团股份有限 刻度，摇匀，按上述液相条件，分别进样２０ ，记录色谱图峰 面积。以各对照溶液浓度的对数和相应峰面积的对数进行线 性回归，得回归方程为：Ｙ＝１．７２０ ６Ｘ＋２．５５２ ７，Ｒ ：０．９９９ １。 公司，１１０２０３）；甲醇为色谱纯；水为纯化水；异山梨醇（山东 方明药业集团股份有限公司，１１０５０１，１１０５０２，１１０５０３。） ２方法与结果 结果表明异山梨醇在１００～３００ ｔｘｇ・ｍＬ 浓度范围内，峰面 齐鲁药事・Ｑｉｌｕ ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＡｆｆａｉｒｓ ２０１２ ，Ｄｆ． ．曼 果与国家药品标准比较，结果见表２。 表２准确度测定结果比较表 ・４６５・ 积的对数与浓度的对数呈良好的线性关系，结果见表１与 图１。 表１异山梨醇线性关系考察 ＼ 项目本法 国家标准 浓度㈣＼ 含量（％）平土 （嘞艘）（％）含量（％）平均直（嘞姻，（％） ２．９样品测定精密量取样品溶液和对照品溶液各２０ Ｌ， 分别进样，按外标法计算含量，测得结果与国家药品标准比 图１异山梨醇峰面积对数与浓度对数线性关系 较，结果见表３。 表３样品含量测定结果比较表（ ：３） ２．５精密度试验精密量取对照溶液２０ ，按上述液相条 件，连续进样６次，记录色谱图峰面积。结果分别为： １０５ １９０、１０６ ８５４、１０５ ８５１、１０７ ４６４、１０４ ５８３、１０５ ５５６，平均 １０５ ９１６．３，ＲＳＤ为１．０％。结果表明，精密度良好。 ２．６重复性试验 取同一批号（１１０５０１）样品适量５份，精 密量取，按样品测定项下的方法，测定异山梨醇的含量，ＲＳＤ 为０．８４％。 ３结果与讨论 ３．１ 试验表明，本测定方法简单，测定结果准确可靠，重现 性好，可用于异山梨醇的含量测定。 ３．２流动相的选择考虑到本法的特殊性，采用甲醇一水 ２．７稳定性试验取重复性实验中的第１份溶液，室温下 在０、２、４、６、８ ｈ测定，结果表明，本品的供试品溶液在室温８ ｈ内稳定，计算得：ＲＳＤ＝１．１％，ｎ＝５。 ２．８方法准确度试验精密称取样品（批号１１０５０１）１６ ｍｇ、 （５０：５０）为流动相，且在该流动相条件下，异山梨醇的保留时 间较为理想，理论塔板数高。 参考文献： ２０ ｍｇ、２４ ｍｇ，各３份，分别置于１００ ｍＬ容量瓶中，加流动相 稀释至刻度，精密量取２０ Ｌ，按上述液相条件测定，测得结 ［１］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典２０１０年版（二 部）［Ｓ］．北京：中国医药科技出版社，２０１０：附录Ｖ Ｄ． （上接第４６３页） 表３马来酸氯苯那敏回收率试验结果（／／，＝９） 加入量（ｍｓ）测得量（ｍｇ）回收率（％）平均回收率（％）ＲＳＤ（％） 量最小，二者相差２５０倍。因此，我们选择了马来酸氯苯那 敏有较大吸收的波长２２５ ｎｍ作为检测波长。 表４两种方法含量测定的结果（ｎ＝３） ３．２流动相的选择在很多文献中，将马来酸峰误认为马 来酸氯苯那敏峰，因此我们参照《中国药典）２０１０年版…收 载的马来酸氯苯那敏片含量测定的流动相，明确了马来酸峰 ２．９溶液稳定性试验取重复性试验中的供试品溶液，分 和氯苯那敏峰，为使马来酸、对乙酰氨基酚和咖啡因峰更好 的分离，同时兼顾氯苯那敏峰的保留时间，将磷酸盐缓冲液 和乙腈的比例调整为８５：１５，在该条件下，各色谱峰能实现良 别在０、２、４、８、１０ ｈ进样，测定对乙酰氨基酚、咖啡因和马来 酸氯苯那敏峰面积，ＲＳＤ分别为０．１８％、０．２４％和０．１２％。 ２．１０两种方法测定结果的比较与原方法测定结果比较，见表４。 ３讨论 取样品三批，照建立的方 好分离，且分析时间也较适宜。本方法采用ＨＰＬＣ法同时测 定三组分含量，与原方法相比，具有简便、快速、准确度高、重 现性好等特点，因此本法更利于氨咖黄敏胶囊的质量控制。 参考文献： 法测定对乙酰氨基酚、咖啡因和马来酸氯苯那敏的含量，并 ３．１ 检测波长的选择在氨咖黄敏胶囊中三组分含量相差 ［１］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典２０１０年版（二 部）［Ｓ］．北京：中国医药科技出版社，２０１０：４９． 较悬殊，其中对乙酰氨基酚含量最大，而马来酸氯苯那敏含