一种防止啮齿目动物创面皮肤收缩的固定及缝合方法及其用途[发明专利]

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 CN 110742708 A(43)申请公布日 2020.02.04

(21)申请号 201910839986.4(22)申请日 2019.09.05

(71)申请人 四川大学华西医院

地址 610000 四川省成都市武侯区国学巷

37号(72)发明人 解慧琪　汪祝乐　田茂烜　(74)专利代理机构 成都高远知识产权代理事务

所(普通合伙) 51222

代理人 李高峡　张娟(51)Int.Cl.

A61D 1/00(2006.01)

权利要求书1页 说明书7页 附图8页

()发明名称

一种防止啮齿目动物创面皮肤收缩的固定及缝合方法及其用途(57)摘要

本发明提供了一种防止啮齿目动物创面皮肤收缩的固定及缝合方法及其用途。所述方法包括如下步骤：沿啮齿目动物皮肤创面创缘，环形剪除肉膜，剪除的宽度为2～3mm，将钢圈外径与剪除后的肉膜边缘重合，通过连续锁边缝合法将钢圈与皮肤、肉膜及皮下组织缝合固定，即可。本发明固定及缝合方法防收缩效果显著，能在不影响上皮爬行的同时，最大程度地减少大鼠创面的收缩，且不影响创面的愈合质量。利用其制备的防收缩模型能有效模拟人的创面愈合机制，更准确评估伤口愈合过程中表皮爬行过程，更好观察真皮重塑过程，能够作为研究创面愈合的优良模型，作为评估各种影响伤口愈合因素的平台。其在科学研究方面，有很强的应用价值。

CN 110742708 ACN 110742708 A

权　利　要　求　书

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1.一种防止啮齿目动物创面皮肤收缩的固定及缝合方法，其特征在于：所述的固定及缝合方法包括如下步骤：

沿啮齿目动物皮肤创面创缘，环形剪除肉膜，剪除的宽度为2～3mm，将钢圈外径与剪除后的肉膜边缘重合，通过连续锁边缝合法将钢圈与皮肤、肉膜及皮下组织缝合固定，即可。

2.根据权利要求1所述的固定及缝合方法，其特征在于：所述的啮齿目动物为大鼠、豚鼠、豪猪；优选地，所述的啮齿目动物为大鼠；更优选地，所述的大鼠为SD大鼠。

3.根据权利要求1所述的固定及缝合方法，其特征在于：所述的创面为圆形创面。4.根据权利要求1所述的固定及缝合方法，其特征在于：所述的连续锁边缝合法使用的缝合线为不可吸收缝合线。

5.根据权利要求4所述的固定及缝合方法，其特征在于：所述的不可吸收缝合线为3-0不可吸收缝合线。

6.根据权利要求1所述的固定及缝合方法，其特征在于：所述的钢圈由医用不锈钢丝制成，所述医用不锈钢丝的直径为0.8mm。

7.权利要求1～6任一项所述的钢圈在制备啮齿目动物皮肤缺损防收缩模型中的用途。8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述的啮齿目动物为大鼠、豚鼠、豪猪；优选地，所述的啮齿目动物为大鼠；更优选地，所述的大鼠为SD大鼠。

9.一种啮齿目动物皮肤缺损防收缩模型，其特征在于：它是由权利要求1～6任一项所述的钢圈制备而成。

10.根据权利要求9所述的啮齿目动物皮肤缺损防收缩模型，其特征在于：所述的啮齿目动物为大鼠、豚鼠、豪猪；优选地，所述的啮齿目动物为大鼠；更优选地，所述的大鼠为SD大鼠。

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一种防止啮齿目动物创面皮肤收缩的固定及缝合方法及其

用途

技术领域

[0001]本发明具体涉及一种防止啮齿目动物创面皮肤收缩的固定及缝合方法及其用途。背景技术

[0002]皮肤是人体最大的器官，约占体重的5％～15％，总面积为1.5～2平方米。皮肤覆盖于全身表面，是人体与外界环境之间的天然屏障，一方面可以防止体内水分、电解质及其他物质的丢失，另一方面也可以保护体内各种组织和器官免受物理、化学、机械性和病原微生物性的侵袭。皮肤主要分为表皮、真皮，并借皮下组织与深部组织相连。真皮中尚有毛发、皮脂腺、汗腺等皮肤附属器，因此皮肤具有吸收、排泄、调节体温以及参与物质代谢的作用。临床上常见的皮肤损伤主要包括擦伤、撕裂伤、烧伤以及内科疾病导致的相关并发症如糖尿病溃疡等等。皮肤具有较强的自愈能力，但是严重的烧烫伤、大面积创伤和糖尿病足溃疡等往往久治不愈，长时间不愈合的创面极易发生感染，进而引起其他一系列更为严重的全身并发症。因此，难治性创面的治疗已经成为临床和科研研究的重点和热点。[0003]外科治疗中，对于难治性创面多采用清创、长期换药、皮片及皮瓣移植等方法。但存在的问题是，清创后长期换药所需的治疗时间长，费用多，家庭负担大，疗效不佳，术后创面易发生感染等。皮片和皮瓣移植均存在部分或全部坏死的风险，更为严重的是皮片和皮瓣的获取会给患者带来新的创伤和风险。目前的研究中，治疗难治性创面的手段有：运用特色换药、负压吸引联合促愈合药物、组织工程全层皮肤、ADSCs或BMSCs等加速创面的愈合速度，促进创面愈合。这些研究采用的动物多为猪、SD大鼠、c57小鼠等，动物模型为全层皮肤缺损模型。其中，SD大鼠又以抗感染能力强、价格便宜、创面愈合周期短和管理方便等优势，被广泛地运用于各种创面修复的实验研究中。

[0004]SD(Sprague-Dawley)大鼠是大鼠的一个品系，1925年，美国Sprague Dawley农场用Wistar大鼠培育而成。其毛色白化，主要特性为：①头部狭长、尾长接近于身长，产仔多，生长发育较Wistar为快。10周龄时雄性大鼠体重可达300～400g，雌性大鼠达180～270g。②性情比Wistar大鼠稍为凶猛。③对疾病的抵抗力较强，尤其对呼吸道疾病的抵抗力很强。④自发性肿瘤的发生率较低。⑤对性激素敏感性高。因而被广泛用于药理、毒理、药效及GLP等实验。在创面修复研究方面，SD大鼠的创面愈合主要由创面周围正常皮肤的收缩和皮肤的爬行共同参与，但与其他动物不同的是，大鼠皮肤下存在一层啮齿目动物特有的类似肌肉的组织，称为肉膜，肉膜的存在使得大鼠的创面愈合过程中，收缩起到的作用比爬行更大，这也使得大鼠的创面愈合速度比其他常用实验动物更快。[0005]但是，人的创面愈合机制主要是以表皮细胞的爬行作用为主，因此研究者们尝试用硅胶圈固定在大鼠背部创面周围，通过防止肉膜的收缩来模拟人的创面愈合机制。如今，硅胶圈固定法已经被广泛应用于大鼠创面愈合实验研究中。但是在具体研究的实践过程中发现硅胶圈防收缩的方法存在以下不足：第一，硅胶圈的规格并没有统一的标准，而其防收缩性能会因为硅胶圈的厚薄、软硬而发生变化，可能会成为实验研究过程中影响实验本身

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的额外干扰因素。第二，硅胶圈需要用缝线固定在皮肤创缘周围，而在创面愈合的过程中，创缘的收缩力会变大，缝线会和硅胶圈本身形成切割作用。当硅胶圈被缝线切割之后，硅胶圈就失去了防收缩的作用。第三，硅胶圈是固定在动物皮肤表面的，缝线的大部分也是裸露在外，体型较大和身体柔软的动物能够咬到硅胶圈和缝线，使硅胶圈产生形变或者断裂，从而影响防收缩的效果。第四，硅胶圈本身属于异体材料，且其缝合后与皮肤之间的缝隙容易藏污纳垢，与创面长时间接触可能会造成创面感染，增加创面不愈的风险。因此亟需寻找一个新的更有效的方法来防止大鼠的创面收缩。

发明内容

[0006]为了解决这个问题，本发明提供了一种防止啮齿目动物创面皮肤收缩的固定及缝合方法及其用途。

[0007]本发明提供了一种防止啮齿目动物创面皮肤收缩的固定及缝合方法，所述的固定及缝合方法包括如下步骤：

[0008]沿啮齿目动物皮肤创面创缘，环形剪除肉膜，剪除的宽度为2～3mm，将钢圈外径与剪除后的肉膜边缘重合，通过连续锁边缝合法将钢圈与皮肤、肉膜及皮下组织缝合固定，即可。

[0009]本发明操作方法简单，本领域技术人员均可以操作。理由如下：[0010]首先，本发明的主体为啮齿目动物，本领域公知地，啮齿目动物具有皮肤以及与皮肤紧密连接的肉膜，当其皮肤出现创面后，皮肤以及肉膜结构均会清楚的地暴露出来，本领域技术人员很容易就能找到肉膜。本领域技术人员找到肉膜后，环形剪去肉膜是很容易的，剪除肉膜时，剪除的宽度为2～3mm，也是本领域技术人员可以实现的。[0011]其次，连续锁边缝合是一种常见的缝合方法，针从距创缘约1mm皮肤下、钢圈内缘内侧穿出皮肤，然后在皮肤外跨过皮下钢圈从钢圈外缘的皮外穿过皮肤、肉膜达皮下，再从皮下跨过钢圈穿过钢圈内缘处皮下组织，第一针缝合后打结，继而用同样的缝合方法以连续锁边缝合整圈钢圈，最后一针与第一针所留线头打结固定，即可。[0012]综上，连续锁边缝合是本领域的常规缝合手段，而啮齿目动物的皮肤、肉膜、皮下组织也是本领域技术人员知晓且容易找到的组织，因此利用连续锁边缝合方法将钢圈与皮肤、肉膜及皮下组织缝合是本领域技术人员很容易操作的方法。因此，本发明的固定及缝合方法是本领域技术人员容易实现，能够在产业上使用的方法，具备实用性。[0013]进一步地，所述的啮齿目动物为大鼠、豚鼠、豪猪；优选地，所述的啮齿目动物为大鼠；更优选地，所述的大鼠为SD大鼠。[0014]进一步地，所述的创面为圆形创面。[0015]进一步地，所述的连续锁边缝合法使用的缝合线为不可吸收缝合线。[0016]进一步地，所述的不可吸收缝合线为3-0不可吸收缝合线。[0017]进一步地，所述的钢圈由医用不锈钢丝制成，所述医用不锈钢丝的直径为0.8mm。[0018]本发明还提供了前述的钢圈在制备啮齿目动物皮肤缺损防收缩模型中的用途。[0019]进一步地，所述的啮齿目动物为大鼠、豚鼠、豪猪；优选地，所述的啮齿目动物为大鼠；更优选地，所述的大鼠为SD大鼠。

[0020]本发明还提供了一种啮齿目动物皮肤缺损防收缩模型，它是由前述的钢圈制备而

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进一步地，所述的啮齿目动物为大鼠、豚鼠、豪猪；优选地，所述的啮齿目动物为大

鼠；更优选地，所述的大鼠为SD大鼠。[0022]本发明中，3-0不可吸收缝合线是型号为3-0的强生慕丝丝线编织非吸收性缝合线。因为3-0的线粗细程度刚好合适。如果线太细，则起不到固定钢圈的作用，而且后期会因为肉膜的收缩力而断裂，起不到防收缩的效果。如果线太粗，在缝合时创伤会比较大，并且会对创面周缘的上皮产生影响，可能会影响上皮的正常爬行。[0023]本发明中，圈指的是任选一个顶点为起点，沿着不重复的边，经过不重复的顶点为途径，之后又回到起点的闭合途径称为圈。[0024]本发明中，皮下为皮下组织。

[0025]本发明防止大鼠创面皮肤收缩的固定及缝合方法防收缩效果显著，能够在不影响上皮爬行的同时，最大程度地减少大鼠创面的收缩，且不影响创面的愈合质量。利用本发明防止大鼠创面皮肤收缩的固定及缝合方法制备的大鼠皮肤缺损防收缩模型能够有效的模拟人的创面愈合机制，更准确评估伤口愈合过程中表皮的爬行过程，更好地观察真皮的重塑过程，能够作为研究创面愈合的优良模型，作为评估各种影响伤口愈合因素的平台。其在科学研究方面，有很强的应用价值。[0026]本发明采用统一了材质、尺寸的钢圈取代现有技术的硅胶圈，应用于啮齿目动物皮肤缺损防收缩模型的制备中，不仅统一了钢圈的使用标准，尽可能排除了额外干扰因素；而且过程中不会破坏钢圈内部结构，钢圈也不易产生形变或者断裂，能够维持良好的防收缩作用，有效的模拟人的创面愈合机制，效果非常优良。[0027]显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。[0028]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

[0029]图1为硅胶圈组术后即刻大体图。

[0030]图2为不剪肉膜单纯间断缝合固定钢圈组术后即刻大体图。[0031]图3为不剪肉膜单纯连续缝合固定钢圈组术后即刻大体图。[0032]图4为剪肉膜联合单纯间断缝合固定钢圈组术后即刻大体图。[0033]图5为剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组术后即刻大体图。[0034]图6为空白对照组创面愈合过程。[0035]图7为硅胶圈组创面愈合过程。

[0036]图8为不剪肉膜单纯间断缝合固定钢圈组创面愈合过程。[0037]图9为不剪肉膜单纯连续缝合固定钢圈组创面愈合过程。[0038]图10为剪肉膜联合单纯间断缝合固定钢圈组创面愈合过程。[0039]图11为剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组创面愈合过程。[0040]图12为动物实验一中各实验组创面愈合率；A：不剪肉膜单纯间断缝合固定钢圈

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组；B：不剪肉膜单纯连续缝合固定缝合钢圈组；C：硅胶圈组；D：剪肉膜联合单纯间断缝合固定钢圈组；E：剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组。

[0041]图13为3天时剪肉膜联合单纯间断缝合固定钢圈组(A)、剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组(B)HE染色图。

[0042]图14为7天时剪肉膜联合单纯间断缝合固定钢圈组(A)、剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组(B)HE染色图。

[0043]图15为14天时剪肉膜联合单纯间断缝合固定钢圈组(A)、剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组(B)HE染色图。

[0044]图16为21天时剪肉膜联合单纯间断缝合固定钢圈组(A)、剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组(B)HE染色图。

[0045]图17为28天时剪肉膜联合单纯间断缝合固定钢圈组(A)、剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组(B)HE染色图。

[0046]图18为21天时硅胶圈组(如图A)、剪肉膜联合单纯间断缝合固定钢圈组(如图B)、剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组(如图C)的创面再生区域长度比较。

具体实施方式

[0047]本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。[0048]实验动物：

[0049]健康的12周龄的SD雄性大鼠，由北京维通利华实验动物公司和成都达硕实验动物公司提供，实验通过四川大学伦理委员会审核通过。不选择雌性大鼠是为排除创面愈合过程中雌激素的影响。[0050]实验材料：[0051]钢圈1：由直径为0.8mm的医用不锈钢丝制成，钢圈的直径(外径)为22mm，用环氧乙烷灭菌备用。[0052]钢圈2：由直径为0.8mm的医用不锈钢丝制成，钢圈的直径(外径)为23mm，用环氧乙烷灭菌备用。

[0053]硅胶圈1：由外径30mm，内径20mm的天然硅胶柱切割而成，厚度为3mm，用环氧乙烷灭菌备用。

[00]实施例1、利用本发明防止啮齿目动物创面皮肤收缩的固定及缝合方法制备大鼠皮肤缺损防收缩模型[0055](1)大鼠皮肤缺损模型的制备[0056]选用健康的12周龄雄性SD大鼠，首先使用3％戊巴比妥30mg/kg腹腔注射麻醉。麻醉成功后，在术前给予青霉素(60w单位/天)肌肉注射，预防切口感染。接着将动物俯卧位固定于手术台，背部剃毛，于大鼠脊柱两侧背部用标记笔作对称的直径20mm的圆形，之后进行常规消毒铺巾。用高温高压灭菌过的剪刀按照标记笔作的圆形做皮肤缺损，制备直径20mm的圆形皮肤缺损模型。[0057](2)利用本发明固定及缝合方法制备大鼠皮肤缺损防收缩模型[0058]皮肤缺损模型制备成功后，沿SD大鼠皮肤创面创缘，用眼科剪环形剪除肉膜，剪除的宽度为2mm，再将灭菌待用的钢圈1置于剪除肉膜处(钢圈外缘与剪除后的肉膜边缘重

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合)，用3-0不可吸收缝合线，采用连续锁边缝合法缝合钢圈、皮肤、肉膜及皮下组织，将钢圈固定，利用钢圈防止肉膜收缩。[0059]实施例2、利用本发明防止啮齿目动物创面皮肤收缩的固定及缝合方法制备大鼠皮肤缺损防收缩模型[0060](1)大鼠皮肤缺损模型的制备[0061]选用健康的12周龄雄性SD大鼠，首先使用3％戊巴比妥30mg/kg腹腔注射麻醉。麻醉成功后，在术前给予青霉素(60w单位/天)肌肉注射，预防切口感染。接着将动物俯卧位固定于手术台，背部剃毛，于大鼠脊柱两侧背部用标记笔作对称的直径20mm的圆形，之后进行常规消毒铺巾。用高温高压灭菌过的剪刀按照标记笔作的圆形做皮肤缺损，制备直径20mm的圆形皮肤缺损模型。[0062](2)利用本发明固定及缝合方法制备大鼠皮肤缺损防收缩模型[0063]皮肤缺损模型制备成功后，沿SD大鼠皮肤创面创缘，用眼科剪环形剪除肉膜，剪除的宽度为3mm，再将灭菌待用的钢圈2置于剪除肉膜处(钢圈外径与剪除后的肉膜边缘重合)，用3-0不可吸收缝合线，采用连续锁边缝合法缝合钢圈、皮肤、肉膜及皮下组织，将钢圈固定，利用钢圈防止肉膜收缩。

[00]以下通过具体的试验例证明本发明的有益效果。[0065]试验例1、本发明防止啮齿目动物创面皮肤收缩的固定及缝合方法的防收缩效果研究

[0066]1、大鼠皮肤缺损模型的制备

[0067]选用健康的12周龄雄性SD大鼠，首先使用3％戊巴比妥30mg/kg腹腔注射麻醉。麻醉成功后，在术前给予青霉素(60w单位/天)肌肉注射，预防切口感染。接着将动物俯卧位固定于手术台，背部剃毛，于大鼠脊柱两侧背部用标记笔作对称的直径20mm的圆形，之后进行常规消毒铺巾。用高温高压灭菌过的剪刀按照标记笔作的圆形做皮肤缺损，制备直径20mm的圆形皮肤缺损模型。[0068]2、实验1：不同固定及缝合方法制备的大鼠皮肤缺损防收缩模型的防收缩效果[0069]将上述“1、大鼠皮肤缺损模型的制备”中造模成功(制备皮肤缺损模型成功)的SD大鼠随机分为5个实验组，每个实验组5只，每个实验组大鼠采用一种防止创面皮肤收缩的固定及缝合方法处理创面，具体如下：[0070]①硅胶圈组：将灭菌待用的硅胶圈1内缘与创面创缘重合，用3-0不可吸收缝合线，采用单纯间断缝合法缝合硅胶圈与皮肤，针自硅胶圈中部向圈外缘穿入，缝挂皮肤后自圈外缘穿出，将硅胶圈固定于创缘皮肤上，均匀缝挂8针(硅胶圈组术后即刻大体图如图1所示)；

[0071]②不剪肉膜单纯间断缝合固定钢圈组：将灭菌待用的钢圈1置于创缘皮肤下(钢圈1与圆形皮肤缺损为同心圆)，用3-0不可吸收缝合线，采用单纯间断缝合法缝合钢圈与皮肤，针从距创缘约1mm的肉膜下、钢圈内缘内侧穿出皮肤，然后在皮肤外跨过皮下钢圈从钢圈外缘的皮外穿过皮肤、肉膜达皮下；打结将钢圈固定，均匀缝挂8针(不剪肉膜单纯间断缝合固定钢圈组术后即刻大体图如图2所示)；

[0072]③不剪肉膜单纯连续缝合固定钢圈组：将灭菌待用的钢圈1置于创缘皮肤下(钢圈1与圆形皮肤缺损为同心圆)，用3-0不可吸收缝合线，采用单纯连续缝合法缝合钢圈与皮

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肤，针从距创缘约1mm肉膜下、钢圈内缘内侧穿出皮肤，然后在皮肤外跨过皮下钢圈从钢圈外缘的皮外穿过皮肤、肉膜达皮下，第一针缝合后打结，继而用同样方法连续缝合整个钢圈，最后一针与第一针所留线头打结将钢圈固定(不剪肉膜单纯连续缝合固定钢圈组术后即刻大体图如图3所示)；

[0073]④剪肉膜联合单纯间断缝合固定钢圈组：沿SD大鼠皮肤创面创缘，用眼科剪仔细环形剪除肉膜，剪除的宽度为2mm，再将灭菌待用的钢圈1置于剪除肉膜处(钢圈外径与剪除后的肉膜边缘重合)，用3-0不可吸收缝合线，采用单纯间断缝合法缝合钢圈、皮肤、肉膜及皮下组织。

[0074]针从距创缘约1mm皮肤下、钢圈内缘内侧穿出皮肤，然后在皮肤外跨过皮下钢圈从钢圈外缘的皮外穿过皮肤、肉膜达皮下，再从皮下跨过钢圈穿过钢圈内缘处皮下组织，打结将钢圈固定，均匀缝挂8针(剪肉膜联合单纯间断缝合固定钢圈组术后即刻大体图如图4所示)；

[0075]⑤剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组：沿SD大鼠皮肤创面创缘，用眼科剪仔细环形剪除肉膜，剪除的宽度为2mm，再将灭菌待用的钢圈1置于剪除肉膜处(钢圈外径与剪除后的肉膜边缘重合)，用3-0不可吸收缝合线，采用连续锁边缝合法缝合钢圈与皮肤、肉膜及皮下组织，针从距创缘约1mm皮肤下、钢圈内缘内侧穿出皮肤，然后在皮肤外跨过皮下钢圈从钢圈外缘的皮外穿过皮肤、肉膜达皮下，再从皮下跨过钢圈穿过钢圈内缘处皮下组织，第一针缝合后打结，继而用同样的缝合方法以连续锁边缝合整个钢圈，最后一针与第一针所留线头打结固定，将钢圈固定(剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组术后即刻大体图如图5所示)。

[0076]缝合好后，各组都在创面上敷以油纱，再用无菌纱布覆盖，并将其四角缝合固定于皮肤。术后大鼠自由饮食和进水，单笼饲养直至实验结束。在3、7、14、21、28天时观察各组大鼠创面愈合情况，并拍照，计算各组创面愈合率。比较不同的固定及缝合方法对创面愈合率和上皮收缩的影响。创面愈合率＝(1-开放性伤口的面积/原始伤口的面积)×100％。[0077]3、实验2：不同固定及缝合方法制备大鼠皮肤缺损防收缩模型防收缩效果[0078]将上述“1、大鼠皮肤缺损模型的制备”中造模成功(制备皮肤缺损模型成功)的SD大鼠随机分为2个实验组，每个实验组15只，各实验组采用的防止创面皮肤收缩的固定及缝合方法具体如下：[0079]实验组Ⅰ：左侧创面为空白对照组(即不采用防止创面皮肤收缩的固定及缝合方法处理)，右侧创面为硅胶圈组(固定及缝合方法同试验例1“2”中的“①”)；[0080]实验组Ⅱ：左侧创面为剪肉膜联合单纯间断缝合固定钢圈组(固定及缝合方法同试验例1“2”中的“④”)，右侧创面为剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组(固定及缝合方法同试验例1“2”中的“⑤”)。[0081]空白对照组，以及采用防止创面皮肤收缩的固定及缝合方法处理后的各组，都在创面上敷以油纱，再用无菌纱布覆盖，并将其四角缝合固定于皮肤。术后大鼠自由饮食和进水，单笼饲养直至实验结束。各组分别在3、7、14、21、28天取材(取材时取大鼠皮肤，如大鼠皮肤与其下的肌层难以分离，可将肌层一起取下。每次取材时使用过量戊巴比妥钠麻醉大鼠致死)，石蜡包埋后H&E染色。通过组织学评价上皮收缩情况和皮肤的再生情况。通过组织学比较并评价空白对照组、硅胶圈组、剪肉膜联合单纯间断缝合固定钢圈组、剪肉膜联合连

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续锁边缝合固定钢圈组的再生上皮的长度，从而评价不同防收缩方法的优缺点。[0082]4、实验结果

[0083]各组防止大鼠创面皮肤收缩的固定及缝合方法的防收缩效果如图6～18所示。[0084](1)图6为不做防止创面收缩处理(空白对照组)的创面愈合情况，图7～11为采用实验1中各组固定及缝合方法处理后创面愈合过程图，图12为实验1中各组固定及缝合方法的创面愈合率。由图6～12可知，与空白对照组相比，各组防止大鼠创面皮肤收缩的固定及缝合方法都不同程度地减慢了创面的收缩。但是，与其他各组相比，本发明防止大鼠创面皮肤收缩的固定及缝合方法(剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组)防止大鼠创面皮肤收缩的效果最好。从图9、图11和图12看到不剪肉膜单纯连续缝合固定钢圈组创面愈合也很慢，甚至在第28天其创面愈合率小于本发明剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组，这是因为不剪肉膜单纯连续缝合固定钢圈组出现了创面的感染，导致创面发生了延迟愈合，已经影响了创面的正常上皮的爬行和愈合。而本发明防止大鼠创面皮肤收缩的固定及缝合方法(剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组)能够在不影响上皮爬行的同时，最大程度地减少创面的收缩，保证创面正常愈合。[0085](2)图13～18为实验2的实验结果图，H&E切片结果显示，剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组的肉膜收缩程度最小，创面再生区域最大，而且创面的愈合质量(包括上皮完全覆盖创面的时间，真皮层的厚度，胶原纤维排列及其成熟度)与其他实验组没有明显区别。说明本发明防止大鼠创面皮肤收缩的固定及缝合方法(剪肉膜联合连续锁边缝合固定钢圈组)能够最大程度地减少创面的收缩，且不影响创面的愈合质量。[0086]综上，本发明采用统一了材质、尺寸的钢圈取代现有技术的硅胶圈，应用于啮齿目动物皮肤缺损防收缩模型的制备中，不仅统一了钢圈的使用标准，尽可能排除了额外干扰因素；而且过程中不会破坏钢圈内部结构，钢圈也不易产生形变或者断裂，能够维持良好的防收缩作用，效果非常优良。同时，本发明防止大鼠创面皮肤收缩的固定及缝合方法防收缩效果显著，能够在不影响上皮爬行的同时，最大程度地减少大鼠创面的收缩，且不影响创面的愈合质量。利用本发明防止大鼠创面皮肤收缩的固定及缝合方法制备的大鼠皮肤缺损防收缩模型能够有效的模拟人的创面愈合机制，更准确评估伤口愈合过程中表皮的爬行过程，更好地观察真皮的重塑过程，能够作为研究创面愈合的优良模型，作为评估各种影响伤口愈合因素的平台。其在科学研究方面，有很强的应用价值。

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