离心实验报告（方案）（分离并鉴定叶绿体和线粒体、细胞核）
一、实验仪器
剪刀、研钵、三角瓶、小烧杯、纱布、超声波细胞破碎仪、玻棒、离心管、注射器、
离心管架、普通高速离心机、超速离心机、载玻片、盖玻片、胶头滴管、接种环、镊子、擦 镜纸、吸水纸、冰箱、数码显微镜 二、实验药品
液氮、50mmol/LTirs-盐酸缓冲液（PH=7.4）、0.25mol/L蔗糖溶液、詹纳斯绿染液（线
粒体）、姬姆萨染液（细胞核）、香柏油（人工）、二甲苯 三、实验材料 蒌蒿鲜茎叶、根 四、实验原理
将破碎后的细胞进行离心实验，设置不同转速梯度，从而得到不同转速下的沉淀，收
集沉淀用数码显微镜进行观察，看是否分离得到线粒体和叶绿体。 五、溶液配制 1、缓冲液的配制：
50mmol/LTirs-盐酸缓冲液配法（PH=7.4）：50ml0.1mol/LTris溶液溶于42ml0.1mol/L的盐酸， 混匀加水稀释至100ml
0.1mol/LTris：12.114g溶于1L水，0.1mol/L盐酸：1ml36%HCL定容与100ml水中
2、0.25mol/L蔗糖溶液（悬浮介质）： 8.56g溶于100ml水中
注：蔗糖等一些小分子溶液，可以预先在分离的样品中形成密度梯度，在上面再加上一层少
量的大分子溶液后，离心，大分子就形成层状而沉降。若含有沉降系数不同的许多成分，就
会出现许多层。然后0.25mol/L的蔗糖形成的密度梯度的最大值比叶绿体匀浆介质密度要小， 满足密度梯度离心的要求
低温下研磨一般都是保护作用，防止蛋白质变性 3、1%詹纳斯绿染液：
称取50mg(pH7.4)，詹纳斯绿B溶于5ml生理盐水中，稍微加热使之溶解后，过滤，即为1%原液 4姬姆萨染液(Giemsa)：
称取姬姆萨粉0.5g，甘油33 ml 、纯甲醇33ml。先在姬姆萨粉中添加少量甘油，然后在研钵内研磨
至无颗粒状，再将剩余甘油倒入混匀，56℃左右保温2h使
其充分溶解，最后加甲醇混匀，成为姬姆
萨原液，保存于棕色瓶。使用时吸出少量，用1/5mol/L磷酸缓冲液作10~20倍稀释。 六、实验步骤：
1、样品采集：采集菊科蒿属植物蒌蒿鲜样（茎、叶），用自来水和去离子水反复冲洗干净，
淋干水分，剪成碎片至于研钵内加液氮研成精细粉末，称取5g（0.5g）粉末溶于200ml（20ml）
缓冲液混匀测ph=7.15（量多需等比例扩大）
2、细胞破碎：将混合液分装入100ml三角瓶中，用超声波细胞破碎仪进行细胞破碎。机器
参数设置如下：6号变幅杆（10-100ml），超声时间3s，间隙时间3s，总时20min，温度21℃， 功率45%。
5、超、高速离心实验：
（1）、将破碎溶液进行过滤（用两层纱布），上层残渣即为细胞壁部分（收集入冰箱保存待
测），滤液为原生质体部分（包括各种细胞器和细胞液等），待离心。
（2）将滤液分装入离心管，先用高速离心机进行初步离心实验，依据现有资料设置离心力 和转速，参数如下：
离心力（转数） 所得
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